【正文】 ( 0 . 3 5 3 3 )G o r d o n i a s p . C Y S K 2 ( 0 . 0 4 4 6 )M y c o b a c t e r i u m s p . X 7 B ( 0 . 0 1 0 4 )R. e r y t h r o p o l i s I G T S 8 ( 0 . 0 0 1 0 )R. e r y t h r o p o l i s L S S E S 8 1 ( 0 . 0 0 8 6 )d. 下一步，計劃分別克隆表達(dá) DszA， B，C酶。 Biostat B2 pO2 (%) time(h) Biostat UD50 MFCS Control bfxhgf xc hg f 生物脫有機(jī)硫催化劑優(yōu)化生產(chǎn) 高濃度脫硫細(xì)胞培養(yǎng)優(yōu)化 不同碳源對菌株生長的影響 02468101214161820葡萄糖 甘油 醋酸 檸檬酸鈉菌體濃度(620nm) 高濃度脫硫細(xì)胞培養(yǎng)優(yōu)化 不同的濃度甘油對生長的影響 00 1 2 3 4甘油濃度(%)比生長速率(h1) 高濃度脫硫細(xì)胞培養(yǎng)優(yōu)化 不同的氮源濃度對生長的影響 0 . 0 0 . 5 1 . 0 1 . 5 2 . 002468101214菌體濃度(620nm)氯化銨 (%) 高濃度脫硫細(xì)胞培養(yǎng)優(yōu)化 pH值恒定流加碳源菌體生長及在 線檢測參數(shù)曲線 10 20 30 40 50 60 700246810121416菌體濃度X(mg/ml)時間 /h10 20 30 40 50 60 70200300400500600PH攪拌轉(zhuǎn)速(rpm)時間 /h020406080100溶氧飽和度溫度r p m溶解氧飽和度(%) 0102030405060溫度 0246810 PH 處理柴油（ 535 ppm）含硫化合物檢測 X7B休止細(xì)胞作用于柴油后， GCAED檢測含硫化合物變化。 2 8 1 0 f o l d z h e n l i u c k . r u n0255075100125m V o l t sc : \ s t a r \ d a t a \ l i f u l i \ r e s u l t s \ 2 0 0 3 1 0 g a s o l i n e \ 9 。 ? 休斯頓能源生物公司（ EBC）自從 1992年買斷了IGT的脫硫技術(shù)以來，約投資了 5,500萬美元用于研究，使生物脫硫技術(shù)有了長足的發(fā)展 。這將是第一套工業(yè)化規(guī)模的柴油 BDS裝置，處理量為 795 m3/d柴油，同時可產(chǎn)生新型芳香磺酸鹽產(chǎn)品。汽油 BDS工藝預(yù)計在 46年后實現(xiàn)工業(yè)化，目標(biāo)是將汽油產(chǎn)品的硫含量降低到 50 pm以下。 4 0 s a m 1 0 f o l d z h e n l i u . r u n脫前 脫后 4. 實際應(yīng)用情況 ? BDS可廣泛用于處理汽油、餾分油、催化裂解原料油、渣油。 BDS汽油脫硫優(yōu)點 a. 投資成本比 HDS低 50％，操作成本低1525％ b. 使用 BDS不會降解汽油中的辛烷 c. BDS不需要高溫高壓，可以減少能源消耗 d. 不產(chǎn)生 H2S等副產(chǎn)品 e. HDS促使汽油中的一些烯烴飽和，從而降低汽油的辛烷值 汽油脫硫前后含硫有機(jī)化合物的變化 汽油脫硫前后烴類物質(zhì)變化情況 5 10 15 20M i n u t e s0255075100125m V o l t sc : \ s t a r \ d a t a \ l i f u l i \ r e s u l t s \ 2 0 0 3 1 0 g a s o l i n e \ 8 。 ④ 高密度培養(yǎng)脫硫催化劑進(jìn)行燃油生物脫硫試驗 ? 高密度培養(yǎng)脫硫催化劑 ? 進(jìn)行柴油脫硫試驗 ? 進(jìn)行汽油脫硫試驗 ?(I)高密度生長和酶誘導(dǎo)二步式工藝 ：即解除培養(yǎng)中的硫源限制，先用廉價的無機(jī)硫酸鹽代替有機(jī)硫，采用 pH、 碳源等最優(yōu)控制技術(shù)，使菌體生長產(chǎn)量達(dá)到最大 (高密度菌體生長 )，再用少量的有機(jī)硫誘導(dǎo)菌體以制備酶源。 菌株脫硫基因克隆 c. 根據(jù)脫硫基因測序結(jié)果，在 NCBI檢索 DszC酶的同原性序列并進(jìn)行了分析，結(jié)果 如圖 。 菌株代謝 THC分析 5 10 15 20 25 30M i n u t e s2 . 55 . 07 . 51 0 . 01 2 . 51 5 . 01 7 . 5m V o l t sc : \ s t a r \ d a t a \ l i f u l i \ r e s u l t s \ 2 0 0 3 1 1 t h c \ t h c i n e a 2 0 0 3 1 1 6 . r u n5101520m V o l t sc : \ s t a r \ d a t a \ l i f u l i \ r e s u l t s \ 2 0 0 3 1 1 t h c \ t h c i n m e o h 2 0 0 3 1 1 6 . r u n123456m V o l t sc : \ s t a r \ d a t a \ l i f u l i \ r e s u l t s \ 2 0 0 3 1 0 t h c \ . r u n推測的THC代謝途徑 SC H2SC H2OSC H2OOC H2O HT C A親水性集團(tuán)親水性集團(tuán)親水性集團(tuán)親水性集團(tuán)③ 菌株脫硫基因克隆 a. 根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的紅平紅球菌 IGTS8的脫硫基因序列，設(shè)計引物，進(jìn)行 PCR擴(kuò)增獲得了脫硫基因。 M . a u s t r o a f r i c a n u m ( 0 . 0 0 0 0 )M y c o b a c t e r i u m a u s t r o a f r i c a n u m V M 0 4 5 2 ( 0 . 0 0 0 0 )M y c o b a c t e r i u m a u s t r o a f r i c a n u m V M 0 4 4 7 ( 0 . 0 0 0 0 )M y c o b a c t e r i u m a u s t r o a f r i c a n u m V M 0 4 5 6 ( 0 . 0 0 0 7 )M y c o b a c t e r i u m a u s t r o a f r i c a n u m V M 0 5 7 3 ( 0 . 0 0 0 0 )M y c o b a c t e r i u m a u s t r o a f r i c a n u m ( 0 . 0 0 0 0 )M y c o b a c t e r i u m a u s t r o a f r i c a n u m V M 0 4 5 0 ( 0 . 0 0 0 4 )M y c o b a c t e r i u m s p . P Y R 1 ( 0 . 0 0 0 3 )M y c o b a c t e r i u m a u s t r o a f r i c a n u m V M 0 4 5 1 ( 0 . 0 0 1 2 )M y c o b a c t e r i u m s p . P Y R I ( 0 . 0 0 0 8 )M . v a c c a e ( 0 . 0 0 6 0 )M y c o b a c t e r i u m v a c c a e 1 9 3 8 7 3 1 8 ( 0 . 0 0 1 1 )M y c o b a c t e r i u m v a c c a e ( 0 . 0 0 0 0 )M y c o b a c t e r i u m v a c c a e V M 0 5 8 7 ( 0 . 0 0 0 0 )M y c o b a c t e r i u m s p . S R B 1 9 4 8 E 0 4 ( 0 . 0 1 1 3 )M y c o b a c t e r i u m f l a v e s c e n s 6 6 2 5 6 8 8 ( 0 . 0 0 1 1 )M y c o b a c t e r i u m n o v o c a s t r e n s e ( 0 . 0 0 4 3 )M y c o b a c t e r i u m f l a v e s c e n s A T C C 2 3 0 3 3 ( 0 . 0 0 1 6 )M y c o b a c t e r i u m a c a p u l c e n s i s ( 0 . 0 0 3 6 )M y c o b a c t e r i u m f l a v e s c e n s ( 0 . 0 0 3 3 )M y c o b a c t e r i u m d u v a l i i ( 0 . 0 0 5 1 )M y c o b a c t e r i u m s p . M C R O 1 0 ( 0 . 0 0 6 2 )M y c o b a c t e r i u m f l a v e s c e n ( 0 . 0 0 9 4 )M y c o b a c t e r i u m p h l e i ( 0 . 0 0 7 6 )M y c o b a c t e r i u m s p . T A 5 ( 0 . 0 0 6 7 )M . c o n f l u e n t i s ( 0 . 0 0 7 2 )M . s p e c . M a d a g a s k a r ( 0