細(xì)菌內(nèi)毒素檢查相關(guān)問題(文件)
【正文】 集反應(yīng)被抑制。要求驗證試驗選擇的稀釋度至少要比NIC大12倍，但不可超過MVD。預(yù)試驗結(jié)果表明樣品在1：8倍稀釋時，具有抑制作用，不干擾濃度（NIC）為1:16，可選擇用于驗證試驗的稀釋度或濃度為最低不小于1:32，可以選擇1:64。凝膠法的驗證試驗是通過在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和樣品溶液中平行進行鱟試劑標(biāo)示靈敏度的復(fù)核試驗完成，試驗中要求樣品平行4管，設(shè)立樣品陰性對照管，也同樣平行4管。二、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法建立時注意事項及常見問題在方法建立的過程中，對方法的驗證非常重要一個全面可靠的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的方法學(xué)驗證試驗一般應(yīng)注意：首先要了解產(chǎn)品的溶解度，按照適當(dāng)?shù)呐R床用量確定合適的內(nèi)毒素限值，并確證產(chǎn)品對方法是否存在干擾，如果在樣品處理過程中運用了激烈的處理條件或溶劑，還應(yīng)證明所采用方法不會破壞或減少樣品中細(xì)菌內(nèi)毒素含量。總之，只有驗證了整個實驗的每一個環(huán)節(jié)，才能保證方法學(xué)的可靠和成功。常見的問題有：（1）臨床用藥劑量確定不正確，僅用常規(guī)用藥劑量，未考慮臨床可能的人體最大用藥劑量和給藥途徑，在限值計算公式L=K/M中，由于對K值及M值的定義模糊，使K值及M值賦值不準(zhǔn)確，最終導(dǎo)致限值計算錯誤。（3）有的品種細(xì)菌內(nèi)毒素限值從國外藥典抄來，沒有考慮該品種國內(nèi)上市的臨床使用劑量及中國人與國外人均體重等的差異，也造成限值確定不正確。在進行干擾試驗預(yù)試驗時不干擾濃度的確定方法不正確對預(yù)試驗的目的不理解，直接選用一個靈敏度的鱟試劑對應(yīng)的MVD或MVC進行試驗，如無干擾則以該濃度為不干擾濃度，有的甚至直接選用高靈敏度的鱟試劑對應(yīng)的濃度作為不干擾濃度，未找到真正的不干擾濃度，使干擾試驗失去意義。常見有的配制過程中直接使用4倍稀釋供試品溶液或2λ細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度等量混合，造成配制的供試品陽性溶液中細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品或供試品濃度低一倍。又如對樣品進行檢查時，也可以先用原液（預(yù)試驗時原液無干擾）進行試驗，如果內(nèi)毒素檢查也能合格，則不必進行稀釋，這樣做的直接好處是可以節(jié)約成本和時間，減少污染環(huán)節(jié)。應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行中國藥典2005年版細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的有關(guān)規(guī)定藥典規(guī)定：（1）當(dāng)進行新藥的內(nèi)毒素檢查試驗前，或無內(nèi)毒素檢查項品種建立內(nèi)毒素檢查法時，需進行干擾試驗；（2）當(dāng)鱟試劑、供試品的配方、生產(chǎn)工藝改變或試驗環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗結(jié)果的變化時，需重新進行干擾試驗。只有嚴(yán)格按照有關(guān)要求進行了干擾試驗，并證明該條件下無干擾，才能建立新的檢查方法。如：某注射液，說明書中臨床靜脈給藥最大劑量為7mg/h，制劑規(guī)格為10mg/ml，計算內(nèi)毒素限值為420EU/ml，計算MVD＝1680倍。因為大部分注冊藥品其生產(chǎn)工藝、所使用的敷料等均不是很穩(wěn)定，不同廠家生產(chǎn)的鱟試劑其抗干擾能力也不盡相同，因此僅用一個廠家的鱟試劑或僅對一個批號的樣品進行干擾試驗，沒有足夠的代表性，確定的不干擾濃度可能在后續(xù)的試驗中不準(zhǔn)確。供試品陽性溶液配制
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