【正文】 A H5 ? Influenza B HA ? RSV Group A ? RSV Group B ? Metapneumovirus ? European strains ? American strains ? CoVSARS ? CoVOC43 ? CoV229E ? HPIV1 ? HPIV2 ? HPIV3 ? HPIV4 ? HPIV4a ? HPIV4b ? Chlamydia pneumoniae ? Mycoplasma pneumoniae ? Legionella pneumophila ? Streptococcus pneumoniae ? Haemophilus influenzae ? Influenza A H7 ? Rhinovirus ? Herpes Simplex Virus 1, 2 ? Varicella Zoster Virus ? Cytomegalovirus ? HIV1 ? HIV2 ? Measles virus ? Mycobacterium tuberculosis ? Pneumocystis carinii ? Coxiella burti Current Respiratory Panel In Progress T H E J E R O M E L . AN D D A W N G R EE N EIN FE C T IO U S D ISE A SE L AB O RA T O R YMAILMA N S C H OO L OF P U B L I C H EA L T H Co l u m b i a U n i ver s it y? Enterovirus ? Adenovirus HEMORRHAGIC FEVER PANEL ? Ebola virus (Zaire) ? Ebola virus (Sudan) ? Marburg virus ? CrimeanCongo hemorrhagic fever virus ? Rift Valley virus ? Hantaan virus ? Seoul virus ? Yellow Fever ? Kyasanur Forest virus ? Lassa virus ? (lineage IV) ? Ebola virus (Reston) ? Junin virus ? Machupo virus ? Dobrava virus ? Tacaribe virus ? Guanarito virus ? Sabia virus ? LCMV ? Chikungunya virus ? Dengue virus group ? Borrelia burgdorferi ? Herpes Simplex virus (1, 2) ? HIV1, 2 ? Neisseria meningitidis ? Rickettsia Spotted Fever Group ? Plasmodium sp Current Panel In Progress T H E J E R O M E L . AN D D A W N G R EE N EIN FE C T IO U S D ISE A SE L AB O RA T O R YMAILMA N S C H OO L OF P U B L I C H EA L T H Co l u m b i a U n i ver s it yA C B Lab Network Epidemiology Microbiology research service training infectious agents samples clinical data GLOBAL SURVEILLANCE NETWORK Animal models drugs vaccines Drosten, Hamburg Lipkin, New York Mackenzie, Perth Pauli, Berlin Peiris, Hong Kong Qian, Beijing PerezBrena, Madrid Swanepoel, South Africa Webster, Memphis Wen, Shanghai Multiplex PCRXMAP 多重 PCR液芯聯(lián)用技術(shù) Diagram LUMINEX XMAP技術(shù)：多指標(biāo)并行檢測系統(tǒng)（流式熒光技術(shù)或液芯技術(shù)） 技術(shù) GENOCA Templex? PCR技術(shù) :多指標(biāo)并行擴(kuò)增 Super Primer Templex? PCR 技術(shù)原理 Templex? PCR 技術(shù)原理 ? 巢示 PCR引物提高了引物間的相容性 ? 低濃度的特異性引物降低了反應(yīng)過程中的背景值 . ? 僅有的一條生物素標(biāo)記的引物使得更容易擴(kuò)大生產(chǎn)以及質(zhì)量控制 . 流式熒光技術(shù)（液芯）原理 —— XMAP 熒光編碼微球技術(shù) 每種微球的地址由兩種紅色熒光顏料的摻入比例唯一決定 顏色編碼的微球 共價交聯(lián)技術(shù) C O N H 反應(yīng)模式 Multiplex Assays with Color Separetion Luminex 100多功能流式點(diǎn)陣儀 流式熒光檢測儀 呼吸道感染 Ⅰ 型 11種 DNA基因組的病原體 呼吸道感染 Ⅱ 型 13種 RNA基因組病毒型病原體 蛋 白 質(zhì) 芯 片 MASATM液相芯片 一 . 基本原理 微小的乳膠顆粒（ Beads,微球）分別染成不同的熒光色，然后再把針對不同檢測物的蛋白（如抗原抗體）以共價方式結(jié)合到特定顏色的微球上。即將大量靶基因或寡核苷酸片段有序地，高密度地（點(diǎn)與點(diǎn)間距一般小于500181。 。 ? 收集病毒顆粒（感染組織勻漿過濾，或者血漿超速離心以收集病毒顆粒），提取 RNA，逆轉(zhuǎn)錄成 c DNA ,構(gòu)成 c DNA表達(dá)文庫。 ? 用慢性非甲非乙肝炎患者的血清篩選庫，結(jié)果得到一個反應(yīng)性克隆。序列分析表明屬于黃病毒科，命名為 HCV。血清學(xué)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)。 基于保守序列的 PCR ? 技術(shù)要點(diǎn) 引物設(shè)計(jì) ? 一種是 簡并 PCR，其所用的是一個混合的引物庫，包含了已知某種病毒高度保守氨基酸區(qū)域的所有可能的核苷酸序列 （設(shè)計(jì)引物之前，列出該病毒家族所有成員的對比圖 ），但簡并度很高時有效引物的濃度不足。 ? 現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)展了多種分離和鑒定差別表達(dá)基因的技術(shù)，其中代表性差異技術(shù) (RDA)和抑制消減雜交技術(shù) (SSH)以其靈敏度高、假陽性率低和重復(fù)性好而相對更受歡迎 代表性差異分析 （ Representational Difference Analysis ,RDA） ? 基本原理：病原微生物感染靶器官或組織時，同時帶入自己的基因組，這樣病理組織就比正常組織多出了病原體基因組。 ? 1995年 Simons等用 GB肝炎因子感染狨猴取同一狨猴感染前和感染后急性期的血漿，分別提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA作 RDA分析， 7個 cDNA克隆序列分析表明，屬于兩種黃病毒，與 HCV有一定同源性命名為 GBVA和 GBVB。一般只需兩輪雜交， 34天即可得到幾十或上百個差異片段 SSH的基本步驟 RDA與 SSH ? 原理相似：都是建立在 PCR技術(shù)和減法雜交的基礎(chǔ)上。 最新的技術(shù) 序列非依賴的擴(kuò)增法： ? 隨機(jī) PCR(random PCR)技術(shù) ? 序列非依賴的單引物擴(kuò)增 (SISPA: sequ