【正文】 度，加少許肌酸結(jié)晶。絕大多數(shù)沙門氏菌培養(yǎng)物呈陽性結(jié)果，即培養(yǎng)基呈彌散性紅色。置于35℃培養(yǎng)96177。陰性反應(yīng)：不生長或微弱生長，而且不變色。如2個TSI培養(yǎng)物皆不能按生化試驗(yàn)證實(shí)分離物為沙門氏菌時，則對同一個25g檢驗(yàn)樣品中保留的尿素酶陰性TSI培養(yǎng)物，按五，5開始進(jìn)行生化學(xué)試驗(yàn)。按本節(jié)鑒定所述，檢驗(yàn)人員根據(jù)自己試驗(yàn)室選擇商品試劑盒與生化管系統(tǒng)相適應(yīng)的一種商品試劑盒。加試劑，觀察與記錄結(jié)果。c. 凡不符合a或b的培養(yǎng)物，應(yīng)按上述五,27項(xiàng)中有關(guān)規(guī)定作進(jìn)一步試驗(yàn)，或按Ewing(2)氏的有關(guān)項(xiàng)目進(jìn)一步試驗(yàn)，或送至標(biāo)準(zhǔn)定型實(shí)驗(yàn)室，做最后的血清定型與鑒定。重復(fù)沙門氏菌多價鞭毛（H）（按上述五，3）或作SpicerEdwards氏鞭毛（H）血清學(xué)試驗(yàn)。試管標(biāo)貼上樣品編號，分析編號和密碼。依據(jù)聯(lián)邦登記以最快的方式進(jìn)行運(yùn)輸。已發(fā)現(xiàn)的近一千種(或菌株)。沙門氏菌基本介紹　　沙門氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一，其病原沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科，包括那些引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。根據(jù)國際慣例，要求對易受沙門氏菌污染的食品進(jìn)行分類管理，以使大多數(shù)食物不含沙門氏菌，從而有效預(yù)防沙門氏菌病。決定o型原特異性的是脂多糖中的多糖側(cè)鏈部分，以3等阿拉伯?dāng)?shù)字表示。我國已發(fā)現(xiàn)26個菌組、161個血清型。具有鞭毛的細(xì)菌經(jīng)甲醇液固定后，其o抗原全部被h抗原遮蓋，而不能與相應(yīng)抗o抗體反應(yīng)。具有第1相和第2相h抗原的細(xì)菌稱為雙相菌，僅有一相者稱單相菌。由聚n乙酰d半乳糖胺糖醛酸組成。vi抗原的抗原性弱。傷寒沙門氏菌Salmonella Typhi和鼠傷寒沙門氏菌Salmonella Typhimurium這兩個名字，看起來也夠像的?！　騍ANGER中心——還是這個中心，連項(xiàng)目的領(lǐng)導(dǎo)者也跟上面的鼠疫桿菌是同一人——從越南弄來了一種能夠抵抗多種抗生素的傷寒沙門氏菌菌株。由于傷寒的癥與瘧疾和登革熱等病相似，很容易搞混。美國疾控中心通過檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，吃過這些西紅柿的患者檢查中都發(fā)現(xiàn)了沙門氏菌，看來，這是一起嚴(yán)重的沙門氏菌病疫情。但是，以前各州爆發(fā)的疫情幾乎都與人們吃了染上沙門氏菌的肉類、蛋類、乳類有關(guān)，但迄今為止，很少聽說吃蔬果大面積受沙門氏菌污染甚至在人群中引發(fā)大疫情的。此外，兩種病菌還各自擁有幾百個對方所不具備的基因。此后的60年間，用于從食品中分離沙門氏菌的方法實(shí)質(zhì)上與那些用于臨床病料的方法是相同的。這種現(xiàn)象對那些希望從食物樣品中分離出沙門氏菌的食品分析家來說有很大影響，因?yàn)樵谶x擇培養(yǎng)基上直接培養(yǎng)“致傷”的沙門氏菌通常是以細(xì)菌死亡和試驗(yàn)失敗而告終。隨著DNA和抗體技術(shù)的發(fā)展，近10～15年間發(fā)展了無數(shù)改進(jìn)的方法，其中許多可以在48h內(nèi)檢出沙門氏菌，這些方法通稱為快速檢測。第二，是選擇性增菌步驟，它使沙門氏菌生長而使肉湯中同時存在的微生物數(shù)量減少，與預(yù)增菌培養(yǎng)基相似，對選擇性培養(yǎng)基的選擇，也存在許多不同的觀點(diǎn)。傳統(tǒng)沙門氏菌檢測法全過程需時至少4～7天，才能得出明確的診斷結(jié)果。但常規(guī)中最廣泛采用的是以雙位點(diǎn)ELISA技術(shù)即夾心ELISA為基礎(chǔ)的方法。該法采用預(yù)先包被了沙門氏菌(AE群)單克隆抗體的微量板，加入經(jīng)增菌處理的樣品，反應(yīng)后再加入一定的指示劑，作用畢后用酶標(biāo)儀測定OD值來判定結(jié)果。黎兆滾等人的微量板ELISA法(Salmonellatest1)樣品制備過程分三步，共耗時24h：①選用營養(yǎng)肉湯進(jìn)行預(yù)增菌(6h)，使“致傷”、冷凍的沙門氏菌復(fù)蘇。ELISA方法本身，則僅需要大約2h而已(其中30min是操作時間，90min是孵育時間)。免疫色譜卡片極易操作，且由于無需要特殊設(shè)備，很適合小型實(shí)驗(yàn)室使用。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37176。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在1015%NaCl肉湯中生長。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細(xì)菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：　　食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴(yán)，運(yùn)輸過程受到污染；奶?；蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r，對肉體其他部位的污染。金黃色葡萄球菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：：外毒素，分α、β、γ、δ四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。C培養(yǎng)24小時。在BairdParker平板上菌落為圓形，直徑23mm，顏色灰或黑色，周圍有一渾濁帶。C培養(yǎng)，每隔半小時觀察一次，連續(xù)觀察6小時，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內(nèi)容物不流動，判為陽性。C培養(yǎng)24小時，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性?！　》乐菇瘘S色葡萄球菌對奶及其制品的污染：如牛奶廠要定期檢查奶牛的乳房，不能擠用患化膿性乳腺炎的牛奶；奶擠出后，要迅速冷至10℃以下，以防毒素生成、細(xì)菌繁殖。葡萄球菌(streptococcus)鏈球菌(肉湯培養(yǎng)物,革藍(lán)氏染色)?！　θ庵破芳庸S，患局部化膿感染的禽、畜尸體應(yīng)除去病變部位，經(jīng)高溫或其他適當(dāng)方式處理后進(jìn)行加工生產(chǎn)。2．金黃色葡萄球菌腸毒素檢測　　金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測主要有動物試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)及酶聯(lián)免疫吸附等方法，在此就不一一贅述。　　耐熱核酸酶試驗(yàn)：將24小時肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭DNA平板，36177?！　⊙獫{凝固酶試驗(yàn)：，置36177。C培養(yǎng)2448小時。1．金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)　　樣品處理：無菌取25g或25mL食品樣品，放入225mL滅菌生理鹽水中均質(zhì)，制成101稀釋液。腸毒素可耐受100176。C內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時間越短；　　存放地點(diǎn)，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素；　　食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。因而，食品受其污染的機(jī)會很多。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽性。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑12mm。金黃色葡萄球菌及檢驗(yàn)一、生物學(xué)特性　　典型的金黃色葡萄球菌為球型，顯微鏡下排列成葡萄串狀。最新式的沙門氏菌免疫學(xué)檢測法，利用經(jīng)特異性抗體敏化的免疫色譜卡片為基礎(chǔ)。③使用營養(yǎng)肉湯(蛋白胨水)進(jìn)行后增菌(4h)，使沙門氏菌的數(shù)量大大增加。ELISA法檢出沙門氏菌的極限范圍在105～106個細(xì)胞/ml，因此，要得出可靠的結(jié)果，食物樣品首先必需進(jìn)行預(yù)增菌、選擇性增菌，通常還要在含有D甘露糖的肉湯(M肉湯)中進(jìn)行后增菌，以促進(jìn)鞭毛發(fā)育。采用微量滴定板作為固態(tài)基質(zhì)使反應(yīng)形式標(biāo)準(zhǔn)化，并促成其自動化。細(xì)菌菌體或鞭毛抗原的特異性抗體的存在，使得人們可以建立一些快速方法來檢測以食品為載體的病原。由于沒有任何一種培養(yǎng)基可以全面地保持所有食品基質(zhì)或各種沙門氏菌血清型，所以，較適當(dāng)?shù)淖龇ň褪鞘褂脙煞N培養(yǎng)基平行地進(jìn)行試驗(yàn)。第一步(預(yù)增菌)，將樣品加到一種高營養(yǎng)、無選擇性的培養(yǎng)基中，溫度37℃，使那些“致傷”的細(xì)菌復(fù)蘇及使所有微生物生長。雖然這些方法本身證明是可靠的，但卻很費(fèi)力、耗時，需要4～7天才能完成。第一，通常，沙門氏菌的含量水平在污染食品中比有感染病人的病料中要低很多；第二，食品本身的性質(zhì)會干擾病原的檢測，例如，某些食品中固有菌群可能處在一個很高的水平，從而影響特定細(xì)菌的選擇性分離和鑒定；第三，與臨床病料不同的是，經(jīng)過加工的食品，由于加熱、干燥、高含鹽量、酸和冷凍等因素的作用，其中的沙門氏菌受到了尚不致命的損傷或稱“致傷”。已知的腸道沙門氏菌有2000種之多，有幾種已經(jīng)在測序中，屆時大家彼此對照起來看，就更有意思了。不光是食用西紅柿，其他瓜果蔬菜也一樣。美國人對這種病菌一點(diǎn)都不陌生，每年全國大約報告40000例沙門氏菌感染病例?！　∫咔椋好绹松晕骷t柿“中毒”　　西紅柿中含有沙門氏菌生吃西紅柿等新鮮的時蔬水果是再平常不過的事了，然而，在美國中西部和南部30個州，近日卻有數(shù)百人因生食了從超市或是餐館購買的新鮮西紅柿而出現(xiàn)發(fā)燒、腹瀉、腹痛等癥狀，這些西紅柿進(jìn)口自墨西哥?？茖W(xué)家希望，這種單一的口味會使它比較容易對付，只要阻斷它感染人類的途徑，就有希望根除這種疾病?！　抽T氏菌只感染人類，損害肝、脾和骨髓，每年導(dǎo)致1600萬人生病，60萬人死掉，由于越來越多菌株具有抗藥性，情況可能變得更糟。故測定vi抗體有助于對傷寒帶菌者的檢出。新從患者標(biāo)本中分離出的傷寒桿菌、丙型副傷寒桿菌等有此抗原。h抗原刺激機(jī)體主要產(chǎn)生lgg抗體?！　∩抽T氏桿菌的h抗原有兩種，稱為第1相和第2相。o抗原刺激機(jī)體主要產(chǎn)生lgm抗體。鼠傷寒桿菌有12四個；豬霍亂桿菌有7二個。沙門氏菌抗原構(gòu)造與分類　　o抗原　　為脂多糖，性質(zhì)穩(wěn)定。人畜感染后可呈無癥狀帶菌狀態(tài)，也可表現(xiàn)為有臨床癥狀的致死疾，它可能加重病態(tài)或死亡率，或者降低動物的繁殖生產(chǎn)力。其中與人體疾病有關(guān)的主要有甲組的副傷寒甲桿菌，乙組的副傷寒乙桿菌和鼠傷寒桿菌，丙組的副傷寒丙桿菌和豬霍亂桿菌，丁組的傷寒桿菌和腸炎桿菌等。沙門氏菌沙門氏菌（Salmonella）　　沙門氏菌病的病原體。放置培養(yǎng)物于培養(yǎng)容器內(nèi)并加蓋FDA印章封口，此培養(yǎng)物的記錄(以上E11)放在搬運(yùn)箱內(nèi)，但不要放在加蓋FDA印章的容器內(nèi)。培養(yǎng)物要放在腦心浸液瓊脂斜面的試管(13X100mm或16X125mm)內(nèi)遞送。如果上述試驗(yàn)仍為陰性，把該培養(yǎng)物定為無動力菌株。置于35℃培養(yǎng)24h。并按下列原則對培養(yǎng)物進(jìn)行分類：a. 用商品化試劑盒擬定為沙門氏菌的培養(yǎng)物，若沙門氏菌菌體（O）血清學(xué)試驗(yàn)陽性與沙門氏菌鞭毛（H）血清學(xué)試驗(yàn)陽性的則報告為沙門氏菌。組裝試劑盒，配制試劑盒所需試劑。 9. 沙門氏菌屬的擬定性鑒定。凡培養(yǎng)物具有表2所列任何一小項(xiàng)結(jié)果，為非沙門氏菌則棄去。陽性反應(yīng)：能生長，通常伴隨顏色由綠色變蘭色。對KCN陽性，VP試驗(yàn)陽性及甲基紅試驗(yàn)為陰性培養(yǎng)物，皆可作為非沙門氏菌棄去。絕大多數(shù)沙門氏菌VP試驗(yàn)陰性，即整個肉湯不呈粉紅至紅色變化。1) 在室溫下按下述進(jìn)行VogesProskauer氏(VP)試驗(yàn)：移取1mL48h培養(yǎng)物于試管中，并將剩余的MRVP肉湯于35℃再培養(yǎng)48h。大多數(shù)沙門氏菌為陰性結(jié)果。2h。沙門氏菌鞭毛（H）試驗(yàn)陽性表明有沙門氏菌抗原，但不具有沙門氏菌生化特性者，應(yīng)對培養(yǎng)物作純分離（按上述五、1），按上述五、2開始重新做試驗(yàn)。b、 菌體(O)群試驗(yàn). 如有各群菌體（O）抗血清，包括Vi，代替沙門氏菌多價菌體（O）抗血清，按上述五，5a試驗(yàn)。將混合液前后傾斜移動1min，并在良好照明下對著黑暗背景觀察，任何程度的凝集都視為陽性反應(yīng)。這一區(qū)域的下部加1滴生理鹽水。（用已知沙門氏菌培養(yǎng)物同所有抗血清做予試驗(yàn)）。4) 沙門氏菌血清學(xué)鞭毛（H）試驗(yàn)。3) 吲哚試驗(yàn)。因偶爾會出現(xiàn)未接種的丙二酸鹽肉湯在存放期間變蘭（陽性反應(yīng)），所以應(yīng)有未接種的丙二酸鹽肉湯管作對照。有生長者（有渾濁）為陽性。從24h色氨酸培養(yǎng)