【正文】 儀、系列電泳儀、高速離心機、超低溫冰箱、紫外分光光度計、凝膠成像儀、氣相色譜儀、液相色譜儀、 酶標(biāo)儀、蛋白層析系統(tǒng)、超純水系統(tǒng)、倒置顯微鏡、多功能立體解剖鏡、高壓滅菌器、各種型號的超凈工作臺、培養(yǎng)箱多臺。 圖 14 實驗室及其設(shè)備 研究開發(fā)類項目 18 3）科研條件 實驗室面積 2500 平方 米，農(nóng)業(yè) 微生物研究中心專業(yè)從事農(nóng)業(yè)生物藥物開發(fā)研究，固定工作人員26 人，其中研究員 4 人，博士 6 人，具有碩士學(xué)位的 18 人，同時招收福建農(nóng)林大學(xué)，福州大學(xué)，福建師范大學(xué)，廈門大學(xué)碩士研究生在讀人員 20 多 人。申請發(fā)明專利 7 項（ 20202020）。RACE 等技術(shù)。用免疫接種劑 鄂魯冷特 300 倍液對茄子苗進行灌根，用清水對照，處理面積 4 畝，在茄子結(jié)果期調(diào)查發(fā)病率，使用免疫接種劑發(fā)病率低于 8%，不使用免疫接種劑發(fā)病率高于 47%，防治效果達 83%。對侵染特性研究表明，最佳接種濃度為102 以上，最佳接踵溫度為 22℃ 以上，最佳接種方法為灌根和剪葉法。青枯雷爾氏菌脂肪酸多態(tài)性與生化型之間不存在相關(guān)性。 經(jīng)過脂肪酸分析，可將檢測菌株分為 3 個類群。 C． 青枯雷爾氏菌種下分化脂肪酸型的研究 利用 氣相色譜技術(shù)檢測不同青枯雷爾氏菌 (Ralstonia solanacearum)菌株細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸，分析其脂肪酸分布的多態(tài)性；研究青枯雷爾氏菌脂肪酸多態(tài)性與青枯雷爾氏菌現(xiàn)有種下分化方法之間的關(guān)系。成功研制出該生防菌的存活基質(zhì)，建立了該菌劑生產(chǎn)工藝和保質(zhì)技術(shù)，并使該菌劑能在田間有效定殖。 STRR 基因檢測 紫外分光檢測 異原蛋白吸附檢測 液相色譜檢測 蛋白電泳檢測 圖 4 生防菌對 青枯雷爾氏菌致弱作用的檢測 電鏡菌體觀察 研究開發(fā)類項目 13 圖 5 生防菌致弱前后青枯雷爾氏菌 EPS 和胞外蛋白變化檢測 該研究生產(chǎn)出防青枯病的生物農(nóng)藥 —―安地 ‖，申報了國家專利，產(chǎn)品通過農(nóng)業(yè)部田間農(nóng)藥登記實驗，結(jié)論是對茄子青枯病防治效果在 7585%，優(yōu)于農(nóng)用鏈霉素 (附 件 I)。 致病力菌株 生防菌處理 弱菌株 清水對照 致病力菌株 弱菌株 無污染 圖 1 生防菌對青枯雷爾氏菌致弱作用 研究在《農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報》 [2020， 12：（ 3） ]發(fā)表了《生防菌對青枯雷爾氏菌的致弱特性》。 明確了福建省大豆疫霉菌的無毒基因組成及致病型；研究并建立了大豆疫病疫情監(jiān)測控制關(guān)鍵技術(shù)體系。 項目中提出的 7 種 的農(nóng)業(yè)生物藥物的開發(fā)，都有很好的基礎(chǔ)，繼續(xù)進行開發(fā)研究具有很好 產(chǎn)業(yè)化前景 。 （ 2）課題申請單位研究基礎(chǔ) 1）研究開發(fā)經(jīng)歷 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)微生物研究中心 （農(nóng)業(yè)微生物創(chuàng)新團隊） ，建 有 福建省農(nóng)業(yè)生物藥物工程技術(shù) 研究中心 （省科技廳科技平臺） 和福建省農(nóng)物農(nóng)藥工程研究中心 （省發(fā)改委技術(shù)平臺） 。和 539。 TN5 插入體系的建立、轉(zhuǎn)化菌株篩選與致病性測定、轉(zhuǎn)化后菌株的生物學(xué)特性研究、無致病力菌株抗病機理研究 、制劑發(fā)酵技術(shù)研究、對茄科種苗控病特性的試驗。因為植物疫苗安全、高效、無殘留，符合 ―生態(tài) 文明 ‖要求，對保障糧食及食品安全具有非常重要的意義。 2020 年 由中國植物保護學(xué)會生物防治專業(yè)委員會與北京同昕綠源生物科技股份有限公司共同主辦的 ―2020 植物免疫與植物疫苗研討會 ‖在京舉行。因為它們的功能類似醫(yī)用和獸用疫苗，因此也稱之為植物疫 苗。同時生物農(nóng)藥隨著作物、病蟲、定殖、氣候、土壤、季節(jié)、地理等因素的影響，使用效果差異很大，作用不穩(wěn)定，無法形成基本的應(yīng)用需求和產(chǎn)業(yè)規(guī)模。 2020 年 1 月，國家有關(guān)部門已經(jīng)頒布規(guī)定全面禁止甲胺磷等 5 種高毒農(nóng)藥的生產(chǎn)、銷售和使用，預(yù)計將有 10 萬 t 的高毒農(nóng)藥退出國內(nèi)農(nóng)藥市場，這為新型高效、廣譜和安全的生物農(nóng)藥的發(fā)展提供了廣闊的市場。因此，可以認(rèn)為它們對自然生態(tài)環(huán)境安全、無污染。其有效活性成分完全存在和來源于自然生態(tài)系統(tǒng)，在環(huán)境中會自然代謝，參與能量與物質(zhì)循環(huán)。生物體農(nóng)藥中昆蟲病原真菌、細(xì)菌、病毒等均是從感病昆蟲中分離出來，經(jīng)過人工繁殖再作用于該種昆蟲。 生物農(nóng)藥的應(yīng)用前景，生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥比較，生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥相比，其有效成分來源、工業(yè)化生產(chǎn)途徑、殺蟲防病機理和作用方式等方面有著許多本質(zhì)的區(qū)別。但是，長期依賴和大量使用有機合成化學(xué)農(nóng)藥，已經(jīng)帶來了環(huán)境污染、生態(tài)平衡破壞和食品安全等一系列問題，對推動農(nóng)業(yè)經(jīng)濟實現(xiàn)持續(xù)發(fā)展帶來許多不利的影響。 1972 年，我國規(guī)定了新農(nóng)藥的發(fā)展方向：發(fā)展低毒高效的化學(xué)農(nóng)藥， 逐步發(fā)展生物農(nóng)藥。按照聯(lián)合國糧農(nóng)組織的標(biāo)準(zhǔn)，生物農(nóng)藥一般是天然化合物或遺傳基因修飾劑，主要包括生物化學(xué)農(nóng)藥 (信息素、激素、植物調(diào)節(jié)劑、昆蟲生長調(diào)節(jié)劑 )和微生物農(nóng)藥 (真菌、細(xì)菌、昆蟲病毒、原生動物或經(jīng)遺傳改造的微生物 )2 個部分，農(nóng)用抗生素制劑不包括在內(nèi)。 （ 2） 植病生防 的 生物肥藥關(guān)鍵技術(shù)的研究與應(yīng)用 國內(nèi)外發(fā)展現(xiàn)狀與趨勢 幾十年來，在世界人口成倍增長的情況下，化學(xué)農(nóng)藥防治植物病蟲害，抑制雜草繁衍，對促進農(nóng)業(yè)生產(chǎn)發(fā)揮了重要作用，為人類的食品安全供應(yīng)作出了不可磨滅的作用。因此迫切需要一種快速、簡便而可靠的方法對該病原菌進行檢測。 對國內(nèi)區(qū)域性發(fā)生的病害，可阻斷或減低疫區(qū)的進一步擴大；對已經(jīng)普遍發(fā)生的通過土壤、種苗和灌溉水傳播的病害，亦可通過檢測監(jiān)測 在特定區(qū)域內(nèi)建立無病生產(chǎn)基地，生產(chǎn)出 優(yōu)質(zhì) 農(nóng)產(chǎn)品；對季節(jié)性發(fā)生危害嚴(yán)重的病害，可通過病原監(jiān)測指導(dǎo)病害的安全防治，降低農(nóng)藥的使用，降低生產(chǎn)成本減輕對環(huán)境的污染。另外，前期研究證明，大腸桿菌表達的免疫蛋白能引起煙草細(xì)胞凋亡，活性氧產(chǎn)生，過氧化氫 等植物抗病早期信號反應(yīng)，誘導(dǎo)煙草 PR蛋白積累及抗病相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平提高（如 PAL， NPR1等），木質(zhì)素和胼胝質(zhì)含量增加，說明該免疫蛋白具有誘導(dǎo)植物抗病的功能，通過系統(tǒng)研究有望獲得新功能蛋白專利。 植物疫苗的制備技術(shù)可獲得兩個以上實用專利。 描述如下 ： I、 亞熱帶果蔬土傳病害分子監(jiān)測 關(guān)鍵技術(shù) ：有望獲得作物 枯萎病菌分子檢測引物及其檢測方法 、 一種大豆疫霉根腐病菌分子檢測引物及其檢測試劑盒 、 辣椒疫病菌的分子檢測引物 及其用法 三個以上的專利 。 創(chuàng)新點：生物肥藥克服了生物農(nóng)藥保存期短和田間定殖能力差的弱點。有理由相信通過政策的支持和國家經(jīng)濟的快速發(fā)展的拉動，我國生物農(nóng)藥的發(fā)展前景一片光明。二 是生產(chǎn)過程中的支持，在生產(chǎn)過程中涉及到生物農(nóng)藥的裝置，國家統(tǒng)一制訂規(guī)范與政策，在水、電、汽、稅收等方面給予一定優(yōu)惠，從而提升生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥在價格上的競爭優(yōu)勢，有效降低生物農(nóng)藥的生產(chǎn)成本。但是 生物農(nóng)藥良好生態(tài)與安全性能并不被市場認(rèn)可，業(yè)界人士認(rèn)為主要因素有：一是推廣應(yīng)用力度不夠；二是價格高、效果慢而且廣譜性較差；三是劑型較少且質(zhì)量不穩(wěn)定。全國約有 240 多家生研究開發(fā)類項目 5 物農(nóng)藥生產(chǎn)企業(yè)，年產(chǎn)量約 12 萬噸，銷售額占農(nóng)藥銷售總額的 5%左右。國內(nèi)也開展了免疫蛋白的大量研究，如疫霉菌（ Phytopththora spp.）、鏈格孢菌 (Alternaria spp.)、木霉菌 (Trichoderma spp.)等真菌產(chǎn)生的蛋白效應(yīng)子能誘導(dǎo)水稻、煙草、棉花和玉米等作物獲得系統(tǒng)抗性。 近年的研究表明，誘導(dǎo)植物免疫抗性已成為綠色植保的新途徑 。 20202020 年行業(yè)增長速度基本上比較穩(wěn)健， 2020 年收入將達到 億元；2020 年利潤可達 億元（中投顧問發(fā)布的《 20202020 年中國生物農(nóng)藥市場投資分析及前景預(yù)測報告》） ， 表現(xiàn)出良好的增長性。高效、低毒、低殘留是農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展方向，主要包括兩大類 ——高效、低毒的化學(xué)農(nóng)藥和生物農(nóng)藥，所以生物農(nóng)藥的發(fā)展前景廣闊。 植物疫苗生產(chǎn)技術(shù)與福建福農(nóng)生化有限公司結(jié)合，植物疫苗應(yīng)用示范與廈門如意集團有限公司結(jié)合。 TN5 插入體系的建立、轉(zhuǎn)化菌株篩選與致病性測定、轉(zhuǎn)化后菌株的生物學(xué)特性研究、無致病力菌株抗病機理研究、制劑發(fā)酵技術(shù)研究、對茄科 、瓜類和豆類作物的 種苗控病特性的試驗 。 （ 2）項目任務(wù) I、 亞熱帶果蔬土傳病害分子監(jiān)測 ： 重要 作物土傳病害 （疫病、青枯病、枯萎病、線蟲病和根腐病） 病原菌快速檢測技術(shù)應(yīng)用范圍很廣 ， 對國內(nèi)未發(fā)生的病害，通過口岸有效的檢測檢疫降低傳入的幾率； 利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)， 建立茄科的辣椒疫病菌分子標(biāo)記（ MP1）、 番茄鐮刀菌枯萎病菌分子標(biāo)記（ MP2）、 茄子枯萎病菌分子標(biāo)記（ MP3），馬鈴薯青枯病菌分子標(biāo)記（ MP4），瓜類的西瓜、苦瓜和甜瓜枯萎病菌分子標(biāo)記（ MP5）、豆類的大豆疫霉 病菌 分子標(biāo)記（ MP6）及茄科青枯病菌分子標(biāo)記（ MP7）等亞熱帶果蔬重要土傳病害快速檢測與監(jiān)測技術(shù)， 對國內(nèi)區(qū)域性發(fā)生的病害，阻斷或減低疫區(qū)的進一步擴大；對已經(jīng)普遍發(fā)生的通過土壤、種苗和灌溉水傳播的病害，通過檢測 監(jiān)測 在特定區(qū)域內(nèi)建立無病生產(chǎn)基地，生產(chǎn)出 優(yōu)質(zhì) 農(nóng)產(chǎn)品；對季節(jié)性發(fā)生危害嚴(yán)重的病害，通過病原監(jiān)測指導(dǎo)病害的安全防治，降低農(nóng)藥的使用，降低生產(chǎn)成本減輕對環(huán)境的污染。 研究土傳病害生物防治的生物肥藥， 利用豬 糞有機肥 ，接入研究出的防病功能微生物， 以亞熱帶重要果蔬的土傳 病害 為防治對象， 形成 亞熱帶重要果蔬的土傳 病害的生物肥藥， 增強生物肥藥的穩(wěn)定性和定殖能力，提高防治效果； 如芽孢桿菌（ SP1 和 SP2）防治作物 疫病和 青枯病、淡紫擬青霉菌（ SP3）防治作物線蟲病，木霉菌（ SP4）防治作物根腐病、生防功能銅綠假單胞菌（ SP5）防治枯 萎病等土傳病害 。 項目緊密地與 福建 福 農(nóng)生化有限公司（發(fā)改委定點生物農(nóng)藥生產(chǎn)企業(yè)）、廈門如意集團有限公司 (種苗培育 國家 農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化龍頭企業(yè) )， 將多年研究的 作物土傳病害防治 微生物制劑成果， 進行研發(fā)， 通過企業(yè)熟化，直接應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。本研究 以亞熱帶果蔬 （ 包括 茄科如 辣椒、番茄、茄子、馬鈴薯 ， 瓜類 如 西瓜、苦瓜 、 甜瓜 ， 豆類 如大豆 ） 的 土傳病害 （疫病、青枯病、枯萎病、 線蟲病和根腐病等） 為對象，利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù) ， 建立茄科的辣椒疫病菌分子標(biāo)記（ MP1）、 番茄鐮刀菌枯萎病菌 分子標(biāo)記（ MP2）、茄子枯萎病菌分子標(biāo)記（ MP3），馬鈴薯青枯病菌分子標(biāo)記（ MP4），瓜類的西瓜、苦瓜和甜瓜枯萎病菌分子標(biāo)記（ MP5）、豆類的大豆疫霉 病菌 分子標(biāo)記（ MP6）及茄科青枯病菌分子標(biāo)記（ MP7）等亞熱帶果蔬重要土傳病害快速檢測與監(jiān)測技術(shù)， 研究 重要果蔬 土傳 病害病原菌的 分子標(biāo)記，研制 快速 精確的 病原鑒定 檢測 技術(shù) ，最終開發(fā)出 生產(chǎn)上應(yīng)用的 試劑盒，實現(xiàn)對 土傳 病害的 動態(tài) 監(jiān)測， 指導(dǎo)病害的 生物 防治，降低生產(chǎn)成 本減輕對環(huán)境的污染 。與企業(yè)結(jié)合進入生產(chǎn) 。 申報編號： 研究開發(fā)類項目推薦書 所屬領(lǐng)域： （七）農(nóng)用物資 所屬方向： 農(nóng)藥與生長調(diào)節(jié)劑 項目名稱： 亞熱帶果蔬土傳病害分子 監(jiān)測 及生 物 防治 關(guān)鍵 技術(shù)研究與應(yīng)用 推薦單位或?qū)＜遥?福建省科技廳 項目申報單位 ： 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 項目技術(shù)負(fù)責(zé)人 ： 劉波 聯(lián)系電話 ： 13905917339 傳真 ： 059187884262 電子郵箱 ： 2020 年 09 月 14 日研究開發(fā)類項目 I 目 錄 項目信息表 ...................................................................................................................................1 摘要 ..............................................................................................................................................2 一、項目目標(biāo)與任務(wù) .....................................................................................................................2 項目目標(biāo)與任務(wù)需求分析 ..................................................................................................2 （ 1）項目目標(biāo) ................................................................................................................2 （ 2）項目任務(wù) ................................................................................................................3 （ 3）需求分析 ....................................