【正文】 等階段。生殖細胞將在分裂一次，形成兩個精子。產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）一般有兩種途徑，一種是花粉通過胚狀體階段發(fā)育為植物，另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導(dǎo)分化成植株。親本的生理狀況：花粉早期是的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株，選擇月季的初花期。親本植株的生長條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種密度等對誘導(dǎo)成功率都有一定影響材料的消毒如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度有何特點？要使DNA溶解，需要使用什么濃度？要使DNA析出，又需要使用什么濃度？；較高濃度可使DNA溶解；。從理論上分析，預(yù)冷的乙醇溶液具有以下優(yōu)點。補充：DNA的變性是指DNA分子在高溫下解螺旋，其溫度在80℃以上，如在PCR技術(shù)中DNA變性溫度在95℃。當(dāng)鑒定提取出的物質(zhì)是否是DNA時，需要使用什么指示劑進行鑒定？在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺呈現(xiàn)藍色。本實驗用雞血細胞做實驗材料有兩個原因。若選用雞血和洋蔥作實驗材料，則怎樣獲取含DNA的濾液？在雞血細胞液中加入一定量蒸餾水并用玻棒攪拌，過濾后收集濾液；切碎洋蔥，加入一定量洗滌劑和食鹽，攪拌研磨，過濾后收集濾液。在以上實驗中，加入蒸餾水、洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？過濾時應(yīng)當(dāng)選用（濾紙、尼龍布）。最初獲得的DNA濾液含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)，需要進一步提純DNA。在濾液中仍然含有一些雜質(zhì)，怎樣除去這些雜質(zhì)呢？得到的DNA呈何顏色？濾液與等體積的冷卻酒精混合均勻，靜置2～3分鐘，析出的白色絲狀物就是DNA。試管2支，編號甲乙→各加等量5mLNaCl溶液→甲中放入少量白色絲狀物，使之溶解→各加4mL二苯胺，混合均勻→沸水浴5min→觀察顏色變化實驗操作制備雞血細胞液…………加檸檬酸鈉，靜置或離心↓破碎細胞，釋放DNA… 加蒸餾水，同一方向快速通方向攪拌↓→過濾，除去細胞壁、細胞膜等。專題六　植物有效成分的提取課題一　植物芳香油的提取天然香料的來源：植物、動物不同植物的根、莖、葉、花、果實、種子都可以提取芳香油。方法：水中蒸餾：原料放在沸水中加熱蒸餾。通常用壓榨法（通過機械壓縮力將液相物從液固兩相混合物中分離出來的一種簡單操作）萃取法：原理：芳香油易溶于有機溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。所有儀器必須事先干燥，保證無水。具體安裝順序和方法如下。（4）連接冷凝管。常壓蒸餾一般用錐形瓶而不用燒杯作接受器，接收瓶應(yīng)在實驗前稱重，并做好記錄。加熱時可以觀察到，蒸餾瓶中的液體逐漸沸騰，蒸氣逐漸上升，溫度計讀數(shù)也略有上升。分液漏斗的使用方法如下。（3）將分液漏斗放置在大小合適的、并已固定在鐵架臺上的鐵圈中，關(guān)好活塞。（6）重復(fù)上述操作，直至分液漏斗中只放出很少的氣體時為止。：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分離。③安裝蒸餾裝置：按照從左向右、自下到上次序安裝水蒸氣蒸餾裝置。＊注意事項：蒸餾時間不能過短，溫度不能過高。實驗步驟：①橘皮的處理：將新鮮橘皮用清水清洗瀝干。⑤過濾壓榨液：用布袋過濾，濾液再高速離心處理，分離出上層橘皮油。課題二　胡蘿卜素的提取胡蘿卜素性質(zhì)：橘黃色結(jié)晶，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有機溶劑。提取β－胡蘿卜素的方法主要有三種：①從植物中提取②從大面積養(yǎng)殖的巖藻中獲得③利用微生物的發(fā)酵生產(chǎn)實驗步驟①粉碎：使原料與有機溶劑充分接觸，增大溶解度。萃取前，要將胡蘿卜進行粉碎和干燥Ⅲ、胡蘿卜素提取裝置的設(shè)計：萃取過程應(yīng)該避免明火加熱，采用水浴加熱，這是因為有機溶劑都是易燃物，直接使用明火加熱容易引起燃燒爆炸。④過濾：除去萃取液中的不溶物⑤濃縮：蒸發(fā)出有機溶劑鑒定：紙層析法濾紙：18㎝30㎝基線：濾紙下端距底邊2㎝處做一基線，在基線上取A、B、C、D四點。等各種色素完全分開后，觀察標(biāo)準(zhǔn)樣品中位于展開劑前沿的胡蘿卜素層析帶。 通過機械加壓，壓榨出果皮中的芳香油、漂洗、過濾、靜置 使芳香油溶解在有機溶劑中，蒸發(fā)溶劑后就可獲得芳香油、干燥、過濾 利用水蒸氣將揮發(fā)性較強的芳香油攜帶出來、醋酸乙酯、乙醚、苯和四氯化碳這幾種有機溶劑中，哪種最適宜用來提取胡蘿卜素？答：在這五種有機溶劑中，石油醚的沸點最高，在加熱萃取時不易揮發(fā)，所以石油醚最適宜用作萃取劑。點樣應(yīng)該快速細致，在基線上形成直徑２ｍｍ左右的圓點，每次點樣后，可用吹風(fēng)機將溶劑吹干，注意保持濾紙干燥。萃取液的濃縮可直接使用蒸餾裝置。③萃?、?、萃取劑的選擇　水溶性的：乙醇、丙酮水不溶性的：石油醚、乙酸乙酯、 乙醚、苯、四氯化碳等選擇：具有較高的沸點，能夠充分溶解胡蘿卜素，并且不與水混溶。其中最主要的組成成分為β胡蘿卜素。⑦再次過濾：將下層橘皮油用濾紙過濾，濾液與上層橘皮油合并，得到橘皮精油。③清水漂洗：浸泡好的橘皮用流水徹底漂洗干凈，瀝干。石灰水：防止壓榨時滑脫，提高出油率，降低壓榨液黏稠度，過濾不堵塞篩眼。⑤分離油層：向乳濁液加入NaCl溶液后，利用分液漏斗分離出上面的油層。實驗步驟：①采集玫瑰花：采集盛花期（5月中上旬）的玫瑰花，清水清洗瀝干。蒸餾完畢，應(yīng)先撤出熱源，然后停止通水，最后拆卸蒸餾裝置，拆卸的順序與安裝時相反。（4）取下分液漏斗，用右手手掌頂住漏斗頂塞并握住漏斗頸，左手握住漏斗活塞處，大拇指壓緊活塞，將分液漏斗略傾斜，前后振蕩（開始振蕩時要慢）。（2）塞好活塞后，把活塞旋轉(zhuǎn)幾圈，使?jié)櫥植季鶆?。在整個蒸餾過程中，應(yīng)保證溫度計的水銀球上常有因冷凝作用而形成的液滴。蒸餾裝置安裝完畢后，可以在蒸餾瓶中加幾粒沸石，防止液體過度沸騰。（5）連接接液管（或稱尾接管）。（2）固定蒸餾瓶，使其離熱源的距離如教科書中圖62所示，并且保持蒸餾瓶軸心與鐵架臺的水平面垂直。安裝儀器一般都按照自下而上、從左到右的順序。方法：原料浸泡在溶劑中→得到浸泡液→有機溶劑揮發(fā)→芳香油。水汽蒸餾：利用外來高溫水蒸氣加熱蒸餾。芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強，成分復(fù)雜，以萜類化合物及其衍生物為主。DNA初步純化………… 與等體積95％冷卻酒精混合，析出白色絲狀物↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。方案二與方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。10mL雞血＋20mL蒸餾水→同方向攪拌→3層尼龍布過濾→濾液去除濾液中的雜質(zhì)為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。為什么加入蒸餾水能使雞血細胞破裂？答：蒸餾水對于雞血細胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進入血細胞內(nèi)，使血細胞脹裂，再加上攪拌的機械作用，就加速了雞血細胞的破裂(細胞膜和核膜的破裂)，從而釋放出DNA。雞血細胞破碎以后釋放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取過程中為了減少DNA的損失，最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細胞液。實驗材料的選取不同生物的組織中DNA含量不同。洗滌劑在提取DNA中有何作用？洗滌劑將細胞膜上的蛋白質(zhì)，從而瓦解細胞膜。利用該原理時，應(yīng)選用怎樣的酶和怎樣的溫度值？蛋白酶，因為酶具有專一性，蛋白酶只水解蛋白質(zhì)而不會對DNA產(chǎn)生影響。在溶解細胞中的DNA時，人們通常選用2mol/LNaCl溶液；將DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中緩慢注入蒸餾水，以稀釋NaCl溶液。提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無菌技術(shù)及接種操作等基本相同。在剝離花藥時，要盡量不損傷花藥（否則接種后容易從受傷部位長生愈傷組織），同時還要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成，通常每瓶接種花藥7～10個,培養(yǎng)溫度控制在25℃左右,～30天培養(yǎng)后,會發(fā)現(xiàn)花藥開裂,長出愈傷組織或形成胚狀體。確定花粉發(fā)育時期的最常用的方法是醋酸洋紅法。合適的花粉發(fā)育時期：一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側(cè)的時期，花藥培養(yǎng)成功率最高注意：①無論哪種產(chǎn)生方式，都要先誘導(dǎo)生芽，再誘導(dǎo)生根②胚狀體：植物體細胞組織培養(yǎng)過程中，誘導(dǎo)產(chǎn)生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成的胚非常類似的結(jié)構(gòu)，其發(fā)育也與受精卵發(fā)育成的胚類似，有胚芽、胚根、胚軸等完整結(jié)構(gòu)，就像一粒種子，又稱為細胞胚?；ǚ郯l(fā)育過程中的四分體是花粉母細胞經(jīng)減數(shù)分裂形成的4個連在一起的單倍體細胞；而動物細胞減數(shù)分裂過程中的四分體是聯(lián)會配對后