自然科學(xué)]in-fusion克隆技術(shù)介紹(文件)
【正文】 不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制June 24, 202213 InFusion克隆不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制 :? 在 cDNA序列中插入 內(nèi)含子 ,熒光蛋白基因? 在 cDNA序列添加 UTRs? 轉(zhuǎn)換純化標(biāo)簽例如 Myc 轉(zhuǎn)換為 His? 缺失 蛋白表達(dá)區(qū)域 …表達(dá)載體選擇插入位點(diǎn)PCR擴(kuò)增純化目的 DNA片段混合InFusionInFusion引物設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增 重組載體?可同時(shí)克隆兩個(gè)或多個(gè) DNA片段June 24, 202214 Step 2: 目的 DNA片段擴(kuò)增Step 3: 一次 InFusion連接反應(yīng)Step 1: 制備線性化載體片段 1 片段 2片段 3線性化載體 重組載體?克服傳統(tǒng)克隆技術(shù)的限制June 24, 202215 克服其它克隆技術(shù)的限制其它克隆技術(shù)的限制 InFusion解決方案?載體的限制 ?不同克隆試劑盒都需要與之匹配的載體?必須使用提供的載體只要載體末端和插入片段末端具有 15個(gè)同源堿基， InFusion就可以將 任意 PCR片段插入任意線性化載體中。?非定向克隆需要篩選目的片段插入方向 正確的克隆InFusion是 基因定向克隆技術(shù) ，因此無(wú)需進(jìn)行目的基因片段正確插入的克隆的篩選?？寺〖夹g(shù)的應(yīng)用June 24, 202216 應(yīng)用多片段克隆 構(gòu)建載體模型插入突變位點(diǎn) 高通量克隆?June 24, 202217 應(yīng)用實(shí)例實(shí)例：多個(gè) DNA片段（ 1 kb, 2 kb, 3 kb)同時(shí)克隆【 方法 】 使用 TaKaRa高品質(zhì) PCR酶分別擴(kuò)增 1 kb、 2 kb、 3 kb的目的 DNA片段 和 kb
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