1分子生物學第六章-基因重組-wenkub
2023-02-06 14:52:31 本頁面
【正文】 ) 。 ?RecBCD是有強烈降解 DNA能力的核酸酶，在 SSB存在下，有解開 DNA雙鏈的酶活性和 ATP酶活性，它在重組中所起的作用便是提供帶有自由 3’端的單鏈 DNA。 ◆ DNA與其互補物在雙鏈上快速配對反應(yīng) ， 產(chǎn)生異源雙鏈連接 ◆ ， 產(chǎn)生一個長的異源雙鏈 DNA區(qū)帶 。 ? 染色體的重組包含部分的物理性的改變：破損與再聯(lián)合 細線期 偶線期 粗線期 雙線期 終變期 同化作用 在 DNA雙鏈中制造一個破損 兩條 DNA雙鏈分子的聯(lián)接作用是基因重組的關(guān)健環(huán)節(jié) ? 同源染色體兩對DNA雙鏈在相應(yīng)點產(chǎn)生 nick， 一條單鏈離開它的伙伴 ，與另一個雙鏈分子的相應(yīng)位置倒易位置 ， 創(chuàng)造了兩個DNA雙鏈之間的連系 ， 這種連接在一起的一對雙鏈叫做交差分子 。 ?斷裂 重新連接：重組沒有在復制中產(chǎn)生， DNA鏈在雙鏈間斷裂、交換和重新連接。與癌癥相關(guān)。由轉(zhuǎn)座酶、整合酶指導。在大腸桿菌由 RecA蛋白指導。不依賴酶。Chapter 6 Geic rebination 遺傳重組 ? 重組 rebination: 是已存在的遺傳物質(zhì)產(chǎn)生新的組合的過程。 ? 分子內(nèi)或染色體內(nèi)重組：通過 DNA的剪切和連接產(chǎn)生新的染色體類型。 ? 位點特異性重組 site specific rebination：序列專一性依賴，非同源性依賴。酶識別轉(zhuǎn)座因子兩端特異序列，但受體位點相對非特異。 ? 人工重組 artificial rebination: 體外進行 DNA的剪切和連接引起的重組，即基因重組。如減數(shù)分裂時染色體交換 ?雜合模型：包括上面兩種特征。 ? 一個鏈與另一個鏈的連接點叫做重組關(guān)節(jié) 。 ? SSB(單鏈結(jié)合蛋白 )的存在刺激了這個反應(yīng) RecA promotes the assimilation of invading single strands into duplex DNA so long as one of the reacting strands has a free end. RecA catalyzes singlestrand assimilation ? RecA介導的 DNA修復 重組熱點 ? 重組起始于雙鏈破損。 Haploid prokaryotes (單倍體生物原核同源重組） Between the two homologous DNA duplex (where) ? partially duplicated DNA of the chromosome ? between chromosomal DNA and “foreign” DNA 1. Nicks made near Chi (GCTGGTGG/each 4 kb) sites by a nuclease with recBCD. 2. RecA binds to ssDNA to form RecAssDNA. How: Holliday model 3. RecAssDNA filaments search the opposite DNA duplex for corresponding sequence (invasion). 4. Seal the nicks and form a fourbranched Holliday structure 5. Branch migration resolving Holliday junction Haploid prokaryotes (原核同源重組） Haploid prokaryotes (原核同源重組） Resolving Holliday junction 二、位點專一性重組 ? 非序列同源性 ? 重組位點特異 ? 由識別特異重組位點的酶指導 ? 導致 DNA序列發(fā)生重排 ? 舉例： ? l噬菌體插入細菌基因組 ? l噬菌體從細菌基因組中切離 1. lencoded integrase (Int 整合酶 ): makes staggeredcuts交錯切點 in the specific sites （ 15bp seq） 2. Int and IHF (integration host factor encoded by bacteria): rebination and insertion 3. lencoded excisionase (XIS): excision of the phage DNA Sitespecific rebination: ( 位點專一性重組） bacteriophage l insertion ? 整合過程要求在attp和 attB之間進行識別；而移除過程則需要在 attL和attR之間進行識別 ? 重組過程是可逆的 ，但反應(yīng)條件不同：整合反應(yīng)需要 int產(chǎn)物和 IHF因子；移除反應(yīng)還需要噬菌體 xis基因產(chǎn)物 。 ? BP 反應(yīng)：與 LR 反應(yīng)反向 , BP 克隆酶混和物 (Int 、IHF 和切除酶 (Xis) )催化表達載體 attB 間的
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