免疫學(xué)實驗指導(dǎo)-wenkub
2023-07-09 16:50:39 本頁面
【正文】 逐滴加入飽和（NH4）2SO4 mL（此時為33%飽和度），4℃，靜置 20 min，3000 r/min 離心 20 min5. 重復(fù)步驟3～4，2次6. mL 生理鹽水中，20攝氏度保存?zhèn)溆盟?、注意事項鹽析時注意飽和硫酸銨加入血清中的速度和方式，邊加邊緩慢搖動，并避免產(chǎn)生氣泡。如次品必須除去重金屬，可在溶液中通入H2S，靜置過夜后濾過，加熱蒸發(fā)H2S即可。蛋白質(zhì)由于分子質(zhì)量和攜帶的電荷不同，可在不同濃度的高鹽溶液內(nèi)分級析出。硫酸銨溶液能使蛋白質(zhì)膠體脫水并中和其電荷而使之沉淀下來（稱為鹽析）?！嶒炓? 免疫球蛋白的粗提（鹽析法）一、 實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)免疫球蛋白的粗提方法 實踐IgG分離純化過程 了解分離純化抗體的原理二、 實驗原理隨著免疫學(xué)的發(fā)展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。不同濃度的硫酸銨鹽析蛋白成分不同，利用這一原理提取所需的免疫球蛋白成分。33% （NH4）2SO4為沉淀IgG的最適飽和度。3． A液： NaH2PO4注意區(qū)別前后2次鹽析所采用的飽和硫酸銨的終濃度。二、實驗原理免疫電泳為區(qū)帶電泳與雙向免疫擴散的結(jié)合。三、 實驗材料和試劑配制人全血清、粗提蛋白、兔抗人血清、瓊脂糖、（）、電泳槽、電泳儀、載玻片、毛細管、塑料吸管四、 實驗步驟％的瓊脂糖，加熱使之融化，（巴比妥緩沖液配制）吸取4－5 mL瓊脂糖溶液，均勻涂布到載玻片上，注意要馬上用吸管尖把瓊脂表面整平，若有氣泡立刻除去，并立即于中間橫放一根毛細管，待凝，制成2mm的瓊脂板。 用微量加樣器加入10－20uL的粗提蛋白和人全血清 ，不要溢出（可加入指示劑） 。刀刻要深及底部，兩道平行線間隔不可大于3 mm。五、 注意事項抗原與抗體濃度比例應(yīng)適當，否則會使某些成分不出現(xiàn)沉淀線。擴散過程中需要在不同時間進行結(jié)果觀察，做好記錄。它以酶作為標記物，與抗體（或抗原）聯(lián)結(jié)，與相應(yīng)的抗原（或抗體）作用后，通過底物的顏色反應(yīng)作抗原抗體的定性和定量，亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織
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