白芨組織培養(yǎng)實施方案-wenkub
2023-05-08 05:47:43 本頁面
【正文】 用化工等方面有巨大的商業(yè)利用價值。分布在中國、日本以及緬甸北部，主產(chǎn)于貴州、四川、湖南、湖北、安徽、河南、浙江、陜西等地。其味苦、甘、澀,性涼,歸肺、胃、肝經(jīng)。又因白及為地生蘭的一種，花開艷麗，被作為庭院、居室及園林景觀綠化苗木大量應(yīng)用。采用白及組織培養(yǎng)可在短時間內(nèi)大量獲取種苗，且成本相對較低，是提高白及產(chǎn)量的強有力措施。結(jié)合盧氏當(dāng)?shù)貙嶋H，探索采用白及無菌播種的技術(shù)路線，通過不同濃度和培方的培養(yǎng)基實現(xiàn)白及組織培養(yǎng)的最佳技術(shù)路線，建立白及快繁體系。本實驗選取盧氏本地優(yōu)質(zhì)白及（Bletilla striata(Thunb．)Reichb．f．）蒴果，采收時間為8月下旬至9月中旬，此時間段胚齡大約為第8周至第22周。②烘箱：用來烘干器械。⑥冰箱：用來貯存化學(xué)藥劑、植物材料等。⑩器械架：在無菌操作期間用來放置滅菌的器械。④純水水桶：用來存放去離子水或蒸餾水。（3）計量器械①量筒：用來量取一定體積的液體。③大肚移液管：用來吸取定量溶液。⑤移液管架：用來放置、固定移液管。（4）滅菌器械①磨砂口玻璃瓶：用來對植物材料進(jìn)行表面滅菌。⑤無菌脫脂棉：用來進(jìn)行器械、植物材料表面的滅菌處理。②小型噴霧器：裝載滅菌藥液，來給超凈工作臺等處噴霧滅菌。⑥接種針：用來轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)、愈傷組織。常用的規(guī)格有直徑9cm、12cm。⑥空調(diào)：用來調(diào)節(jié)操作間、培養(yǎng)室的溫度。(2)器具的洗滌、干燥、消毒、儲藏。培養(yǎng)室：開展白及幼苗的無菌生長提供場所，室內(nèi)需要有培養(yǎng)架及控制溫度、濕度、光照的各種設(shè)備。白及組培選取的培養(yǎng)基即為MS培養(yǎng)基。制備時，按表中排列的順序，以其10倍的用量，分別稱出并進(jìn)行溶解，以后按順序混在一起，最后加蒸餾水，使其總量達(dá)到1L，此即大量元素母液。由硫酸亞鐵(FeSO4它們都是分別稱量，分別配成所需的濃度(～ mg/mL)，用時按培養(yǎng)基配方中要求的量分別加入。配制植物生長素時，應(yīng)先按要求濃度稱好藥品，置于小燒杯或容量瓶中，用1 mol/L氫氧化鈉溶解，再加蒸餾水稀釋至所需濃度。（2）配制培養(yǎng)基的具體操作①根據(jù)配方要求，用量筒或移液管從每種母液中分別取出所需的用量，放入同一燒杯中，并用粗天平稱取蔗糖、瓊脂放在一邊備用。⑤將配好的培養(yǎng)基，分裝到組培瓶中，蓋好瓶蓋并做好標(biāo)記，瓶中培養(yǎng)基的量約為2025mL。培養(yǎng)基通常應(yīng)在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，、溫度122℃條件下，滅菌15—20min。白及組織培養(yǎng)采用白及種子無菌播種的方法，因此要采集無雜菌感染、無病蟲害、生長健壯的優(yōu)良白及品種種子。種子萌發(fā)條件為晝溫2025℃，夜溫1820℃，暗培養(yǎng)7d再轉(zhuǎn)入光培養(yǎng)。誘導(dǎo)叢生芽培養(yǎng)基為：MS+6BA mg/L，其中含蔗糖3%、%、。由于分化形成的芽、原球莖數(shù)量有限，為了大量獲取幼苗，可采用適當(dāng)?shù)睦^代培養(yǎng)基（本實驗采用MS+ NAA —，其中含蔗糖2%、%、），經(jīng)多次分割轉(zhuǎn)接，當(dāng)芽苗繁殖到一定數(shù)量后，再將一部分用于壯苗生根，另一部分保存或繼續(xù)擴繁。為使試管苗移栽后適應(yīng)自然環(huán)境,移栽前要先揭開瓶蓋，放在室內(nèi)自然光下煉苗37d，以提高小苗的抗性和適應(yīng)性。注意保持較高的空氣濕度(80%90%)和適當(dāng)通風(fēng)，并使環(huán)境溫度維持在2025℃。因白及喜濕潤，怕積水
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