【正文】 )另取一支的無(wú)菌吸管從濃度小的－的菌液開(kāi)始，依次分別取菌液于相應(yīng)編號(hào)的培養(yǎng)皿內(nèi)(每個(gè)濃度做個(gè)平板)。)以無(wú)菌操作，用的無(wú)菌吸管吸取樣品于第一管無(wú)菌水中，將吸管吸洗次，搖勻，即為稀釋倍的菌液。．接種環(huán)、酒精好(或煤氣燈)、恒溫箱(培養(yǎng)箱)等。．結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征的確定。 ．微生物在固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落可以是一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體，因此可通過(guò)挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。二、基本原理從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱為微生物的分離與純化。一、目的要求在給水處理的細(xì)菌檢查中，細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和接種也是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。通常，在處理不同水質(zhì)的廢水時(shí)，起作用的微生物群和種類也不同。．吸干，置于油鏡下觀察，陽(yáng)性者為紫色，陰性者為紅色。酒精脫色程度必須嚴(yán)加掌握。．在涂面上，加草酸銨結(jié)晶紫染色液一滴約后，水洗。．染料革蘭氏染色劑)草酸銨結(jié)晶紫染色液甲液 結(jié)晶紫 ％酒精 乙液 草酸銨 蒸餾水 混合甲、乙兩液即成。脹鏝彈奧秘孫戶孿釔賻鏘詠繞敘驄驗(yàn)。．揭開(kāi)器蓋，取出滅菌的物品，將器內(nèi)剩余的水放掉。．滅菌時(shí)間到達(dá)后，停止加熱。當(dāng)蒸汽壓達(dá)到所需的壓力時(shí)，即為滅菌開(kāi)始時(shí)間，這時(shí)要調(diào)節(jié)火力大小，以維持所需的壓力。如沒(méi)有溫度計(jì)，則當(dāng)出氣口排出的蒸汽相當(dāng)猛烈時(shí)，可以認(rèn)為滅菌器內(nèi)冷空氣已經(jīng)全部被蒸汽驅(qū)盡，可以關(guān)閉出氣口。．點(diǎn)火。若熱源為蒸汽，則不必加水。櫛緶歐鋤棗鈕種鵑瑤錟奧傴輥刪髖綠。(三)無(wú)菌水的制備在試管或瓶?jī)?nèi)先盛以適量的自來(lái)水(不用蒸餾水，管口或瓶口用塞子塞好，并用牛皮紙?jiān)o)，使其滅菌后，其水量恰為(用管)或(用瓶)。如裝在錐形瓶中，則的錐形瓶，以裝左右為宜。()成分蛋白陳 牛肉膏 氯化鈉 瓊脂 —5g蒸餾水 ()制法)將上列成分混合后，煮沸至瓊脂完全溶解。待培養(yǎng)基凝固后，即成斜面(圖—)。裝入試管或錐形瓶的培養(yǎng)基量，視試管或瓶子的大小及需要而定。如培養(yǎng)基內(nèi)雜質(zhì)很少，可省略過(guò)濾。加熱時(shí)應(yīng)不斷攪拌以防原料在杯底燒焦。塤礙籟饈決穩(wěn)賽釙冊(cè)庫(kù)麩適緄撾鲅傯。棉塞的大小及形狀應(yīng)如圖—所示。()試管和錐形瓶等的管口或瓶口均需用棉花塞堵塞。將塞好棉花的吸管的尖端，放在—5cm寬的長(zhǎng)紙條的一端，吸管與紙條約成176。銚銻縵嚌鰻鴻鋟謎諏涼鏗穎報(bào)嚴(yán)鮑蠅。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)玻璃器皿的洗刷與包裝．洗刷 玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。．紗布、棉花、報(bào)紙、牛皮紙。一、目的．學(xué)會(huì)玻璃器皿的洗滌和滅菌前的準(zhǔn)備工作。四、記錄（細(xì)菌、霉菌、酵母菌、放線菌各一）序 號(hào)玻片名稱放大倍數(shù)形態(tài)草圖實(shí)驗(yàn)五 培養(yǎng)基的制備及滅菌本次實(shí)驗(yàn)可為下次實(shí)驗(yàn)作準(zhǔn)備。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法 ．復(fù)習(xí)顯微鏡的使用方法，重點(diǎn)放在油鏡的使用部分。二、實(shí)驗(yàn)器材．顯微鏡、擦鏡紙、鏡油（香柏油）、二甲苯等。．利用渾濁度所表示的細(xì)菌生長(zhǎng)量是否包括死細(xì)菌?．你認(rèn)為活性污泥的增長(zhǎng)曲線應(yīng)怎樣測(cè)定才比較合適?實(shí)驗(yàn)四 細(xì)菌、霉菌、酵母菌、放線菌形態(tài)的觀察一、目的．進(jìn)一步掌握顯微鏡的使用方法。鶼漬螻偉閱劍鯫腎邏蘞闋簣擇睜鮪謅。細(xì)菌懸液如果太濃，應(yīng)適當(dāng)稀釋，使光密度降至—范圍內(nèi)。嘰覲詿縲鐋囁偽純鉿錈癱懇跡見(jiàn)鮫請(qǐng)。追加營(yíng)養(yǎng)的兩支試管，在培養(yǎng)后取出，各加入無(wú)菌濃肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，然后繼續(xù)振蕩培養(yǎng)，在培養(yǎng)、后取出，放入冰箱貯存，最后一起比濁測(cè)定。釷鵒資贏車贖孫滅獅贅慶獷緞瑋鱘將。氬嚕躑竄貿(mào)懇彈瀘頷澩紛釓鄧鰲鱺貼。為闡明生長(zhǎng)曲線形成的原因，做個(gè)實(shí)驗(yàn)處理：（）正常生長(zhǎng)曲線；（）追加營(yíng)養(yǎng)液處理；（）加酸處理?；罹鷶?shù)可用平板計(jì)數(shù)(菌落計(jì)數(shù))法或稀釋計(jì)數(shù)法。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容．實(shí)驗(yàn)處理 以一定濃度的細(xì)菌懸液，分別等量地接種在支液體培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)后隔不同時(shí)間取出，放入冰箱保存?；蛭〖?xì)菌懸液，接種到裝有肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的大試管(220mm)內(nèi)，在℃下，振蕩培養(yǎng)。五、思考題怎樣通過(guò)了解微型動(dòng)物種類或數(shù)量變化來(lái)反映廢水處理情況？實(shí)驗(yàn)三 大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)器材．培養(yǎng)基及大腸菌液()營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基 可根據(jù)實(shí)驗(yàn)五中的配方，配置營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基后，再制成斜面。凍鈹鋨勞臘鍇癇婦脛糴鈹賄鶚驥鯀戲。注意在調(diào)換視野時(shí)，不可使相邦的視野重疊或遺漏。堯側(cè)閆繭絳闕絢勵(lì)蜆贅瀝紕縭墾鯇換。原生動(dòng)物中有不少種類是群體，須將群體和群體上的個(gè)體分別計(jì)數(shù)。鍬籟饗逕瑣筆襖鷗婭薔嗚訝擯饃鯫缽。驅(qū)躓髏彥浹綏譎飴憂錦諑瓊針嚨鯤鏵。用阿拉伯樹(shù)膠粘在計(jì)數(shù)用的小方格的四周，使呈一圈凸起的邊框。．顯微鏡、小量筒、滴管等。)記下顯微鏡的放大倍數(shù)。計(jì))。．顯微鏡的保護(hù)法()顯微鏡應(yīng)放置在干燥的地方，使用時(shí)須避免強(qiáng)烈的日光照射。贓熱俁閫歲匱閶鄴鎵騷鯛漢鼉匱鯔潰。用油鏡以前，先用高倍鏡檢查，把要觀察的標(biāo)本放到視野正中。滲釤嗆儼勻諤鱉調(diào)硯錦鋇絨鈔陘鰍陸。()撥動(dòng)回轉(zhuǎn)板使高倍和低倍兩鏡頭互相對(duì)換。()假如因旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器太快，致使超過(guò)焦點(diǎn)，標(biāo)本不能出現(xiàn)時(shí)，不應(yīng)在眼睛注視接目鏡的同時(shí)向下旋轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器，必須從第()步做起，以防因沒(méi)有把握的旋轉(zhuǎn)，使接目鏡與載玻片碰觸。鵝婭盡損鵪慘歷蘢鴛賴縈詰聾諦鰭皚。同時(shí)用眼對(duì)準(zhǔn)接目鏡(選用適當(dāng)放大倍數(shù)的接目鏡)仔細(xì)觀察，使視野完全成為白色，這是光線已經(jīng)通到鏡里的表示。．反光鏡 反光鏡裝在顯微鏡的最下方至集光器。．集光器 集光器在載物臺(tái)的下面，用來(lái)集合由反光鏡反射來(lái)的光線。彈貿(mào)攝爾霽斃攬磚鹵廡詒爾膚億鰾簡(jiǎn)。放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距就很短，直徑就很小，所以自標(biāo)本玻片透過(guò)的光線，因介質(zhì)密度(從玻片至空氣，再進(jìn)入油鏡)不同，有些光線因折射或全反射，就不能進(jìn)入境頭，致使射入的光線較少，物象顯現(xiàn)不清。例如，用放大倍的接物鏡(高倍鏡)與放大倍的接目鏡時(shí)所得的物象的放大倍數(shù)為＝，如果用放大倍的接目鏡則放大倍數(shù)為＝。觀察微生物時(shí)常用放大倍或倍的接目鏡。．調(diào)節(jié)器 鏡筒內(nèi)旁有兩個(gè)螺旋，大的叫粗調(diào)節(jié)器，小的叫細(xì)調(diào)節(jié)器，用以升降鏡筒。使下面的光線可以通過(guò)。機(jī)械部分主要包括：．鏡筒 鏡筒長(zhǎng)度一般是160mm。．通過(guò)對(duì)教學(xué)生物標(biāo)本玻片或曝氣池活性污泥的觀察，認(rèn)識(shí)微生物的形態(tài)。二、實(shí)驗(yàn)器材．教學(xué)生物標(biāo)本玻片或曝氣池活性污泥。它的上端裝有接目鏡，下端有回轉(zhuǎn)板。兩旁有彈簧夾，用以固定標(biāo)本或載玻片。調(diào)節(jié)接物鏡與所需觀察的物體之間的距離。殘騖樓諍錈瀨濟(jì)溆塹籟婭騍東戇鱉納。接目鏡裝在鏡筒上端，在使用過(guò)程中并不經(jīng)常變動(dòng)，所以通常所謂的低倍鏡、高倍鏡或油鏡的觀察主要是指使用不同的接物鏡而言的。所以為了不使通過(guò)的光線有所損失，須在油鏡與玻片中間加入和玻璃折射率（）相仿的鏡油(香柏油， )。使用低倍鏡和高倍鏡時(shí)，一般作活體的觀察，不進(jìn)行染色。集光器可以上下調(diào)整，中央裝有光圈，用以調(diào)節(jié)光線的強(qiáng)弱。(二)顯微鏡使用和保護(hù)的方法．低倍鏡的使用法()置顯微鏡于固定的桌幾上，窗外不宜有障礙視線之物。煢楨廣鰳鯡選塊網(wǎng)羈淚鍍齊鈞摟鰨饗。()把粗調(diào)節(jié)器向上旋轉(zhuǎn)，同時(shí)左眼向接目鏡里觀察。預(yù)頌圣鉉儐歲齦訝驊糴買闥齙絀鰒現(xiàn)。當(dāng)高倍鏡移動(dòng)到載玻片時(shí)，往往鏡頭十分靠近載玻片。()當(dāng)高倍鏡已被推到鏡筒下面時(shí)，向鏡內(nèi)觀察所顯現(xiàn)的標(biāo)本，往往不很清楚，這時(shí)可旋轉(zhuǎn)細(xì)調(diào)節(jié)器，上下移動(dòng)，但不要過(guò)分移動(dòng)。擁締鳳襪備訊顎輪爛薔報(bào)贏無(wú)貽鰓閎。()用過(guò)油鏡后，必須用擦鏡紙或軟綢將載玻片和油鏡所粘著的油拭凈。()接物鏡或接目鏡不清潔時(shí)，應(yīng)當(dāng)用擦鏡紙或軟綢揩擦。)觀察教學(xué)生物標(biāo)本玻片或所制備的微生物標(biāo)本玻片，畫(huà)出所見(jiàn)的形態(tài)草圖。四、記錄序 號(hào)玻片名稱放大倍數(shù)形態(tài)草圖五、思考題．使用顯微鏡時(shí)，哪些地方須特別注意?．使用低倍鎊時(shí)，顯微鏡的放大倍數(shù)一般最大可達(dá)多少?使用高倍鏡時(shí)顯微鏡的放大倍數(shù)是怎樣呢?在什么時(shí)候才需要使用油鏡?蠟變黲癟報(bào)倀鉉錨鈰贅籜葦繯頹鯛潔。．計(jì)數(shù)板 如果沒(méi)有微型動(dòng)物計(jì)數(shù)的計(jì)數(shù)板(微型動(dòng)物，即使是原生動(dòng)物，也比細(xì)菌大得多，—般的細(xì)菌或血球計(jì)數(shù)板都不適用)，則可按照上海織襪四廠和上海師范大學(xué)生物系所介紹的微型動(dòng)物計(jì)數(shù)板制作方法制備如下：買鯛鴯譖曇膚遙閆擷凄屆嬌擻歿鯰錆。這樣，就制成了一塊微型動(dòng)物計(jì)數(shù)板，如圖—所示。三、計(jì)數(shù)方法及步驟 ．將活性污泥法曝氣池混合液輕輕攪拌均勻；如混合液較濃，則可稀釋成：的液體(稀釋方法：取量筒一個(gè)，加混合液再加蒸餾水，輕輕攪拌均勻，即成：稀釋液)。．用低倍顯微鏡進(jìn)行計(jì)數(shù) 注意所滴加的液體不一定布滿整個(gè)格小方格，在顯微鏡下計(jì)數(shù)時(shí)只要把充有液體的小方格，挨著次序一行行的計(jì)算即可。．計(jì)算 設(shè)在一滴水中測(cè)得鐘蟲(chóng)只，則每混合液中含有鐘蟲(chóng)＝只，如測(cè)得輪蟲(chóng)只，則每毫升混合液含輪蟲(chóng)＝只(如滴管每一摘體積為／，所觀察的液體是：稀釋的曝氣池混合液)。)將際本放在顯微鏡低倍鏡下計(jì)數(shù)。然后換算成混合液中的動(dòng)物數(shù)。)上述計(jì)數(shù)方法僅適用于原生動(dòng)物和輪蟲(chóng)，對(duì)個(gè)體較大的微型動(dòng)物和線蟲(chóng)等，則須加大計(jì)數(shù)容量，以免造成誤差。()肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基 配制方法同實(shí)驗(yàn)五中營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，但不加瓊脂。鯊腎鑰詘褳鉀溈懼統(tǒng)庫(kù)搖飭緡釷鯉憮。最后，用比濁法測(cè)定菌體生長(zhǎng)情況?？偩鷶?shù)(包括活菌和死菌的個(gè)數(shù))可在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)而求得，由于細(xì)菌懸液的濃度與其渾濁度成正比，因此也可利用光電比色計(jì)測(cè)定細(xì)菌懸液的光密度，從而推知菌液的濃度，本實(shí)驗(yàn)就是利用光電比色計(jì)進(jìn)行量測(cè)（用平板計(jì)數(shù)法或稀釋計(jì)數(shù)法可測(cè)出活菌數(shù)，從而得出不包括死菌的生長(zhǎng)曲線。 ．實(shí)驗(yàn)步驟()接種 取支裝有滅菌過(guò)的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基試管(每管裝培養(yǎng)基)，貼上標(biāo)簽(注明菌名、培養(yǎng)時(shí)間等)。()培養(yǎng) 將接種后的支液體培養(yǎng)基，置于振蕩器或搖床上。 酸處理的支試管，在培養(yǎng)后取出，加無(wú)菌酸溶液（甲酸：乙酸：乳酸＝：：的體積比），然后繼續(xù)振蕩培養(yǎng)，在培養(yǎng)后取出，放入冰箱貯存。諺辭調(diào)擔(dān)鈧諂動(dòng)禪瀉類謹(jǐn)覡鸞幀鮮奧。以未接種的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)下測(cè)菌懸液的光密度值()。熒紿譏鉦鏌觶鷹緇機(jī)庫(kù)圓鍰緘鶚鱭圓。．以細(xì)菌懸液光密度為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪出大腸桿菌正常、加酸和追加營(yíng)養(yǎng)的條生長(zhǎng)曲線，并加以比較，標(biāo)出正常生長(zhǎng)曲線中對(duì)數(shù)期的大致位置，說(shuō)明曲線變化原因。．觀察幾個(gè)典型細(xì)菌的形態(tài)(示范片)。．示范片()金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌、四聯(lián)球菌、尿八聯(lián)球菌、鏈球菌、球衣細(xì)菌、大腸桿菌、霍亂弧菌等。 ．嚴(yán)格按照顯微鏡的使用方法，依次逐個(gè)觀察細(xì)菌的形態(tài)、構(gòu)造及酵母菌、霉菌、放線菌的形態(tài)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括玻璃器皿的洗刷、包裝和培養(yǎng)基的制備以及滅菌技術(shù)等。．掌握培養(yǎng)基配制和無(wú)菌水制備的方法。．試紙—(或電位計(jì)或氫離子濃度比色計(jì))、洗液、％、％。培養(yǎng)皿、試管、錐形瓶等可先用去污粉或肥皂洗刷，然后用自來(lái)水沖洗。．包裝()培養(yǎng)皿由一底一蓋組成一套，按實(shí)驗(yàn)所需的套數(shù)一起用牛皮紙包裝。交角，折疊包裝紙包住尖端(圖—)，用左手將吸管壓緊，在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，紙條即螺旋式地包在管子外面，余下紙頭折疊打結(jié)，按照實(shí)驗(yàn)需要，可單支包裝或多支包裝，以備滅菌。做好的棉塞，四周應(yīng)緊貼管壁和瓶口，不留縫隙，以防空氣中微生物會(huì)沿棉塞皺折浸入。在制作培養(yǎng)基的過(guò)程中，如不慎將棉塞沾上培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)用清潔棉花重做。(二)培養(yǎng)基的制備．步驟()配制溶液 按培養(yǎng)基的配方，稱取各種原料。裊樣祕(mì)廬廂顫諺鍘羋藺遞燦擾諗魴莖。()分裝 將培養(yǎng)基分裝在試管和錐形瓶?jī)?nèi)。一般制備斜面培養(yǎng)基時(shí)，每支試管裝入的量約為試管高度的／—／。驍顧燁鶚巰瀆蕪領(lǐng)鱺賻驃弒綈閶魎齠。)用蒸餾水補(bǔ)充因蒸發(fā)而損失的水量。管口或瓶口均以棉花塞住。此種適量的水體積可在滅菌器內(nèi)由實(shí)驗(yàn)求得。(四)高壓蒸汽滅菌上面所準(zhǔn)備好的一切玻璃器皿、培養(yǎng)基等均需進(jìn)行滅菌。轡燁棟剛殮攬瑤麗鬮應(yīng)頁(yè)諳絞綽髏鱉。如熱源為蒸汽，則應(yīng)慢慢打開(kāi)蒸汽進(jìn)口，不要讓蒸汽過(guò)猛地沖入滅菌器內(nèi)。這一點(diǎn)應(yīng)持別注意，因?yàn)槿绻淇諝鉀](méi)有排盡，器內(nèi)雖然達(dá)到了一定的壓力，但并不會(huì)達(dá)到相應(yīng)所需的溫度。滅菌時(shí)間的長(zhǎng)短由滅菌物品決定。．待壓力指針降到“”時(shí)，打開(kāi)出氣口。．待已滅菌的物品冷卻后，置陰涼處。四、思考題．培養(yǎng)基是根據(jù)什么原理配制的?營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中的成分各起什么作用?．為什么濕熱滅菌比干熱滅菌優(yōu)越?