【正文】 ； ～ 結果統(tǒng)計分析，完成論文，進行畢業(yè)論文答辯。 河 南 科 技 大 學 畢 業(yè) 設 計 (論 文 ) 杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 畢 業(yè) 設 計（ 論 文 ）任 務 書 （指導教師填表） 填表時間： 2021 年 3 月 5 日 學生姓名 專 業(yè) 班 級 園藝 093 指 導 教 師 課 題 類 型 論文 設計（論文）題目 杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 主要研 究內(nèi)容 1．不同培養(yǎng)時間 對杏鮑 菇液體 菌種 生長 性狀 的 影響 ： 包括菌球直徑，菌球密度，培養(yǎng)基 pH。 主要參 考 文獻 [1] 楊梅．杏鮑菇菌絲深層培養(yǎng)及氨基酸分析研究 [J]．福建師范大學學報 (自然科學版 )， 2021， 16(4)： 7073． [2] 張桂香．食用菌液體菌種生產(chǎn)的技術關鍵 [J]．甘肅農(nóng)業(yè)科技， 1998． [3] 馬立芝，馬浩，武薇杏．鮑菇菌種液體培養(yǎng)研究初報 [J]．中國農(nóng)業(yè)大學 ， 2021． 教研室主任簽字： 2021 年 3 月 5 日河南科技大學畢業(yè) 設計（論文） 杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 摘 要 杏鮑菇是近些年國內(nèi)外迅速發(fā)展的食用菌之一 ，但絕大多數(shù)是采用固體 菌種 ，而 采用液 體菌 種相 對于采 用固 體菌 種無 疑具有 很大優(yōu)勢。綜上所述， 杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期為 六 天。 amylase activity is very low in the first three days, four days increases rapidly fourth, sixth day maximum, the maximum is , then decreased gradually。 liquid culture。杏鮑菇春末至夏初腐生兼寄生于傘形花科植物刺芹等的根上和周圍土中，它是高山、草原、沙漠地帶的一種品質優(yōu)良的大型肉質傘菌。 杏鮑菇營養(yǎng)豐富，質地脆嫩，口感絕佳，風味獨特，故有 “ 草原上的美味牛肝菌 ” 之美稱。 已測 17 種 氨基 酸 總量 為％?，F(xiàn)代醫(yī)學研杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 2 究發(fā)現(xiàn)，食用菌中能顯著增強癌癥患者抵抗力的生理活性物質即為食用菌多糖。栽培杏鮑菇的原料很廣泛，棉子殼、闊葉木屑以及棉稈粉、玉米心等均可，輔之以麥麩等即可正常出菇。液體 菌種具 有固體菌 種不可比擬的優(yōu)勢： 一、 工藝更簡便 。 河南科技大學畢業(yè)設計（論文） 3 三、周期更短 。 五、污染更少 。 七、出菇 整齊上市早 。 1948 年美國科學家 Humfeld 等成功地對蘑菇進行了液體深層培養(yǎng)，從而揭開了人類進行食用菌液體培養(yǎng)和液體菌種研究的序幕，并很快使歐美國家蘑菇生產(chǎn)在五、六十年代快步進入了液體菌種和工業(yè)化栽培時代 [9]。自 80 年代至 20 世紀來，我國許多科研院所的專家教授前輩開始對食用菌深層發(fā)酵、液體菌種及中小型發(fā)酵設備進行了反復、深入和刻苦的研究 ， 為今天我國液體菌種的社會化推廣應用，不論在發(fā)酵設備、工藝技術還是在栽培應用 上，都提供了寶 貴的經(jīng) 驗，奠 定了堅實 的基礎 [10]。 杏鮑菇液體菌種 生產(chǎn)中 存在的問題 液體菌種雖然在栽培上 具有許多優(yōu)點，但目前仍不能 取代固體菌種推廣使用，原因主要有以下 幾 方面 [14]： 1．生產(chǎn)液體菌種的投入比較大。 3． 液體菌種菌絲球懸浮于液體培養(yǎng)基中，營養(yǎng)易于吸收，菌絲生長快，老化也快，液體菌種一旦生產(chǎn)出來應該及早使用，在接種時間上 缺乏周轉余地，一次性投資大。生產(chǎn)的液體菌種可以用作栽培用的母種或原種，也可直接作栽 培種。 液體菌種培養(yǎng)時間短則菌種活力不足，培養(yǎng)時間 長則菌種老化，所以確定適宜的培養(yǎng)周期非常關鍵。 實驗用具 80 目篩網(wǎng)，電磁爐， 250ml 三角瓶，試管，燒杯，吸管，培養(yǎng)皿，玻璃棒，量筒，溫度計，試管架， 100ml 容量瓶， 500ml 容量瓶，比色皿等。用四層紗布過濾，杏鮑菇液體菌種最佳培養(yǎng)周期的研究 6 加熱，再據(jù)實際實驗需要加瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌混勻，待瓊脂融完后，加入葡萄糖，攪拌均勻，稍冷卻后再補足水分至 1000 毫升，分裝試管，加塞，包扎，滅菌 20 分鐘取出，試管擺斜面，冷卻后貯存?zhèn)溆?。? 左右的母種菌塊接種于裝有 150ml 一級培養(yǎng)基的 250ml 三角瓶中，每瓶 3 塊， 25℃ 下靜置 2 天，然后在溫度 25℃ 、轉速150r/min，振蕩培養(yǎng) 5 天 [17]。但是一定要注意， 3， 5二硝基水楊酸和 NaOH 的加入時間一定要很近，或者是先加入 NaOH。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時間（天）為橫坐標 ， 菌球直徑（ mm）為縱河南科技大學畢業(yè)設計（論文） 7 坐標，繪制曲線。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時間（天）為橫坐標 ， 淀粉酶活性 OD 值 為縱坐標，繪制曲線。 曲線的繪制：以培養(yǎng)時間（天）為橫坐標 ， 多酚氧化物酶 OD 值為縱坐標，繪制曲線。（設置三個重復）。 試驗結果見圖 1。培養(yǎng)前期，培養(yǎng)基內(nèi)物理化學性狀較適合菌種生長菌種迅速分裂增殖直徑變小。 由圖 2 可知： 液體菌種菌球密度變化曲線呈拋物線型：隨培養(yǎng)時間的延長菌球密度逐漸增加，在第 35 天呈指數(shù)型增加，在第六天達到最大，每毫升最多有 128 個。 隨著培養(yǎng)時間的延長，由于營養(yǎng)物質的消耗和代謝廢物的增多，使得菌種競爭加劇，生長環(huán)境變惡劣，培養(yǎng)基越來越不適合菌種的生長，菌種生長逐漸變?nèi)跎踔镣Ｖ埂? 由圖 3 可知： 培養(yǎng)基 pH 變化曲線呈緩慢下降趨勢。所以第八天以后培養(yǎng)基已不適合菌種生長了。第八天以 后淀粉酶活性逐漸下降。 羧甲基纖維素酶（ CMC 酶）活性 變化 從液體菌種培養(yǎng)第三天起每天上午用分光光度計 在 520nm 處 測定羧甲基纖維素酶活性，以 OD 值表示 ，試驗結果見圖 5。 河南科技大學畢業(yè)設計（論文） 13 上述變化可能與培養(yǎng)基內(nèi)纖維素有關。 多酚氧化物酶活 性 變化 從液體菌種培養(yǎng)第三天 起每天上午用分光光度計 在 400nm 處 測定多酚氧化酶活性，以 OD 值表示。 多酚氧化 酶 在培養(yǎng)前期分泌較少，活性較低。 03 4 5 6 7 8 9Trianing daysOD values 圖 7 杏鮑菇漆酶活性變化曲線 Figure 7 Pleurotus eryngii laccase activity curve 由圖 7 可知： 杏鮑菇漆酶活性呈倒 V 型。所以總的來講：杏鮑菇四種胞外酶活性在第六天最大，菌種活性最強。 綜上所述，杏鮑菇液體菌種 在第六天最適合河南科技大學畢業(yè)設計（論文） 15 接種。 杏鮑菇菌絲的生長發(fā)育包括菌絲的發(fā)菌、生長周期、生長速度、生長勢、抗逆性、菌絲表現(xiàn)等。對培養(yǎng)過程中各指標的變化情況分析如下：在培養(yǎng)前 3 天內(nèi)有少量新生菌球形成，為原轉接的菌球脫落體；培養(yǎng) 4 天，新生菌球增多，菌球邊緣有大量絨毛狀菌絲形成；第 6 天新生小菌球大量增加，是由于振蕩使大量絨毛狀菌絲脫落形成，所以數(shù)目急劇增多，菌球直徑達到最小；第 8 天菌球數(shù)目減少，可能是由于一些小菌球聚合成大的菌絲體，所以直徑變大； 9 天之后由于菌球開始老化自溶。 從生產(chǎn)銷售總體上看，中國食用菌存在著生產(chǎn)經(jīng)營不規(guī)范、產(chǎn)量大、價格低等問題。國內(nèi)一些食用菌生產(chǎn)企業(yè)設備簡陋，衛(wèi)生條件差，甚至有人用不法手段生產(chǎn)，這樣的產(chǎn)品嚴重損害了食用菌產(chǎn)業(yè)聲譽。如食用菌生產(chǎn)的產(chǎn)地環(huán)境、設施標準，添加劑、殺蟲劑、農(nóng)藥、化肥的使用方法和標準。許多發(fā)達國家已經(jīng)形成了杏鮑菇的工廠化、周年化生產(chǎn)。從市場前景上看，我國的食用菌消費潛力還相當大，我國 13 億人口， 2021 年人均蔬菜年消費量達到 240kg，而人均食用菌年消費量只有 3kg 左右，僅為 1／ 80，潛在消費空間非常大。其二，勞動力素質問題。 本試 驗以 培養(yǎng)時 間為 變量 ，以菌 球直 徑、 菌球 密度、 培養(yǎng)基PH、 四種胞外酶活性為 指標，以期篩選出最佳培養(yǎng)周期，從而為杏鮑菇的標準化、周年化、規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。 感謝在我實驗過程中給過我 極大 幫助的 候軍老師、 劉保國老師等。你們在我試驗過程中幫我解開疑問、解決困難，是你們使我在整個試驗過程中充滿動力，感到溫暖，讓我明白了他人幫助和團隊合作的重要性。 遇到困難時，你們給予了極大的幫助，老師 對我們的耐心，認真負責的態(tài)度， 平易近人的優(yōu)秀品格給我留下了深刻的印象，也讓我為 大學生活畫上圓滿的句號。在以往的日子里，她忘我的工作熱情，執(zhí)著的求真精神，給我留下了深刻的印象，從中我深切地體會到了科學要嚴謹、求實的道理。綜合上述因素，再加上杏鮑菇市場價格普遍偏高的利益誘惑，廣大菇農(nóng)對杏鮑菇規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)工藝創(chuàng)新提出了新的要求，他們急需一種容易掌握、操作方便、培養(yǎng)周期短、適宜大規(guī)模工廠化管理、生產(chǎn)的杏鮑菇栽培方式來取代現(xiàn)有的傳統(tǒng)栽培方式。但一些問題也接踵而至，其一，勞動力的問題。這嚴重制約了我國杏鮑菇的生產(chǎn)和出口。 總體來說，中國食用菌產(chǎn)業(yè)缺乏各環(huán)節(jié)的質量評價標準、質量保