免疫組化染色常見(jiàn)問(wèn)題及解釋(已修改)
2025-06-19 15:20 本頁(yè)面
【正文】 一、為達(dá)到免疫組織化學(xué)技術(shù)的要求，組織固定越新鮮越好。在免疫組化最后結(jié)果的判斷時(shí)，常可見(jiàn)到均勻一片的似非特異性染色的現(xiàn)象，經(jīng)多方研究認(rèn)為，它是一種假性非特異性的染色。因?yàn)槟[瘤組織中含有的抗原較易發(fā)生擴(kuò)散彌散，腫瘤細(xì)胞無(wú)限制的生長(zhǎng)和生長(zhǎng)過(guò)速，導(dǎo)致腫瘤中間部分組織血液供給困難，造成缺血壞死，壞死細(xì)胞中的抗原由于機(jī)體的作用，可以被均勻地散布于細(xì)胞與細(xì)胞間的間質(zhì)，這是抗原發(fā)生彌散的一種方式。另一種抗原彌散的方式就是，由于組織沒(méi)有及時(shí)的固定所引起的。離體的組織不及時(shí)固定，組織就會(huì)自溶，抗原就會(huì)擴(kuò)散，這是一非常普通的常識(shí)，但要做好卻是極不容易。標(biāo)本從外科切除到浸入固定液需要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，在這段時(shí)間里，有的抗原就可以發(fā)生擴(kuò)散。雖然已浸入了固定液，但標(biāo)本較大，固定液的量又不足，當(dāng)然由于固定液的滲透需要時(shí)間，當(dāng)滲入到組織之中時(shí)，中間的細(xì)胞已發(fā)生了變化，抗原也隨著發(fā)生擴(kuò)散，這種現(xiàn)象在產(chǎn)酶多的器官是比較明顯的，如胃癌，當(dāng)切除后標(biāo)本較大，雖然在手術(shù)室期間已放入了固定液，但固定液要透過(guò)肌層達(dá)到胃粘膜面起碼需要幾個(gè)小時(shí)的時(shí)間，當(dāng)固定液發(fā)揮作用時(shí)，組織已經(jīng)發(fā)生變化。因此，這了達(dá)到免疫組織化學(xué)染色的要求，對(duì)于離體的組織盡量快的進(jìn)行固定，有條件的應(yīng)將其剖開(kāi)，早取材，早固定。二、組織脫水必須徹底干凈組織塊取材不能太大過(guò)厚，才能較好地完成脫水的過(guò)程。如果取材太厚，在較短的時(shí)間內(nèi)脫水不完全，將可引起一系列的問(wèn)題，比如浸蠟不徹底，切片不好完成，切不完整。由于先天不足，導(dǎo)致后來(lái)切片染色的脫落，造成染色的失敗，或者由此反復(fù)操作，造成年人力物力的浪費(fèi)，造成病理報(bào)告的延期發(fā)出等。因此，對(duì)取材的要求是除了要求要有藝術(shù)性外，即平整、外觀好看，還要求適中。三、切片必須完整、均勻、平展、無(wú)鄒折應(yīng)用于免疫組織化學(xué)染色的切片，對(duì)切片的質(zhì)量要求較高，切片必須完整，平展、無(wú)汽泡，無(wú)鄒折，這樣有利在染色時(shí)的沖洗，有利于切片的牢固附貼。如果切片不平展，免疫組化染色后，可出現(xiàn)染色不均勻的現(xiàn)象，顏色深淺不一， 不平。如果切片有汽泡切片在烘烤時(shí)，由于汽泡的破裂影響了汽泡周圍的組織，在其周圍可觀察到深淺不一的染色。如果切片有鄒折，免疫組化染色后，在鄒折的地方有深淺不一的顏色，這是一種假陽(yáng)性，容易引起混淆。四、切片的附貼必須牢固，必須使用合適的粘貼劑。免疫組織化學(xué)染色前的前期準(zhǔn)備工作，就是必須對(duì)新的載玻片進(jìn)行處理，新的載玻片表面看起來(lái)很干凈，有人認(rèn)為不需要進(jìn)行任何的處理，都能夠適合使用，這是一種錯(cuò)誤的想法。新出廠的載玻片，表面復(fù)蓋著開(kāi)一層油脂樣的物質(zhì)，如果不加以處理，對(duì)切片的附貼是極為不利的。我們的做法是：新的載玻片，放于玻璃清洗液中浸泡4小時(shí)甚至過(guò)夜，然后取出，經(jīng)自來(lái)水徹底沖洗后，浸入酒精中達(dá)2小時(shí)以上，取出擦干備用或烘干也可。然后再將載玻片浸入了－氨基－三乙氧基－硅烷（3－Aminopropyl triethoxysilane）的稀釋液（1：50用丙酮或無(wú)水乙醇稀釋都可以）中硅化10分鐘，后經(jīng)無(wú)水乙醇洗2次，烘干即可使用。五、切片必須烘烤附貼牢固，既要經(jīng)得起抗原修復(fù)時(shí)高溫的作用而不使輕易脫片，又不至于破壞抗原。應(yīng)用于免疫組化染色的切片。由于整個(gè)過(guò)程需經(jīng)幾個(gè)階段的處理，如抗原修復(fù)時(shí)抗原修復(fù)液的沸騰且需持續(xù)十幾分鐘，PBS的反復(fù)沖洗，有的甚至于4℃冰箱中孵育達(dá)十幾小時(shí)。因此，對(duì)切片的質(zhì)量要求很高，尤其是切片的附貼程度。以往有人主張切片在60℃以下烘烤3060分鐘即可按此進(jìn)行結(jié)果是切片掉片嚴(yán)重，切片松動(dòng)率占100%。切片究竟烘烤多長(zhǎng)時(shí)間才合適，既不脫片和適合各項(xiàng)要求，又不至于破壞抗原。幾組實(shí)驗(yàn)［］診斷P173認(rèn)為，切片在60℃的恒溫干燥箱中烘烤25小時(shí)最為合適。這是因?yàn)椋嚎乖赡褪苋绱说臏囟?，病理科一般使用的石蠟，其熔點(diǎn)在60℃左右，組織浸蠟時(shí)，浸蠟箱中的溫度，一般都調(diào)在65
教學(xué)教案相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1