【正文】 檢驗(yàn)科微生物室 SOP 文件 檢驗(yàn)科微生物實(shí)驗(yàn)室 作業(yè)指導(dǎo)書 細(xì)菌室工作守則 文件編號： LAB－ SOP－ JX001 細(xì)菌室工作守則 。 ，并做好實(shí)驗(yàn)前的各項(xiàng)準(zhǔn)備工作。 ，不準(zhǔn)吸煙、吃東西及用手觸摸面部。盡量減少室內(nèi)活動，以免引起風(fēng)動，無關(guān)人員禁入。 ，必要資料和書籍帶入后，應(yīng)遠(yuǎn)離操作臺。 、編號及試驗(yàn)記錄。未發(fā)出報(bào)告前，請勿丟棄標(biāo)本。 ，接種環(huán)用 完后應(yīng)立即火焰滅菌，沾菌吸管、玻片等用后應(yīng)浸泡在消毒液內(nèi)。 ，應(yīng)立即用過氧乙酸消毒或浸于 3%來蘇兒溶液中 510 分，再用肥皂洗手并沖洗干凈；如誤入口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，并用 1:1000 高錳酸鉀溶液或 3%雙氧水漱口，根據(jù)實(shí)際情況服用有關(guān)藥物。 ，如污染了實(shí)驗(yàn)臺或地面，應(yīng)用 3%來蘇兒覆蓋其上半小時，然后清洗；如污染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。 ，應(yīng)沉著處理，切勿慌張，立即關(guān)閉電閘，積極滅火。易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必須遠(yuǎn)離火源，妥善保存。 作結(jié)束時檢查電器、酒精燈等是否關(guān)閉，觀察記錄培養(yǎng)箱、冰箱溫度及工作情況，用浸有消毒液的抹布將操作臺擦拭干凈，并將試劑、用具等放回原處，清理臺面，未污染的廢棄物扔進(jìn)污物桶，有菌廢棄物應(yīng)送高壓滅菌后處理。 ，并用肥皂和清水洗凈。 ，經(jīng)常清潔，注意防塵和防潮。 作業(yè)指導(dǎo)書 細(xì)菌室消毒隔離措施 文件編號： LAB－ SOP－ JX002 細(xì)菌室消毒隔離措施 ，上班前、下班后開紫外燈（最少半小時）進(jìn)行空氣消毒。 帶入實(shí)驗(yàn)室，必要資料和書籍帶入后，應(yīng)遠(yuǎn)離操作臺。 、蓋片、平皿、試管等用消毒液浸泡，經(jīng)煮沸后清洗或丟棄。 ，所有用于試驗(yàn)的反應(yīng)板、吸頭等用消毒液浸泡（至少 24 小時以上）后清洗或丟棄。 （細(xì)菌、支原體、真菌等培養(yǎng)物），不管標(biāo)本陽性或陰性均用消毒液浸泡后，經(jīng)煮沸消毒，才能清洗或丟棄。 、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均應(yīng)徹底消毒。 、持物鉗、鑷子等的消毒液要定期更換。 慎發(fā)生臨床標(biāo)本或培養(yǎng)物污染工作臺，不要立即用水沖洗，應(yīng)先用紙巾、布等敷料加上消毒液（如 5%石炭酸、 3%來蘇兒等）消毒 30 分鐘以上，然后再清洗。如污染工作服，應(yīng)立即脫下，高壓滅菌。 ，應(yīng)立即用肥皂洗手并沖洗干凈，再外用消毒藥水，如誤入口內(nèi)，應(yīng)立即吐出，并用 1:1000 高錳酸鉀溶液或 3%雙氧水漱口，必要時根據(jù)實(shí)際情況服用有關(guān)藥物。 作業(yè)指導(dǎo)書 微生物實(shí)驗(yàn)室安全與防護(hù) 文件編號： LAB－ SOP－ JX003 在工作區(qū)內(nèi)禁止飲食，吸煙和存放食物及使用化妝品。 實(shí)驗(yàn)室里應(yīng)保持整潔，不存放與工作無關(guān) 的雜物。 工作臺每天至少用消毒劑清潔一次，在溢滲傳染物后要立即消毒、清洗； 進(jìn)入無菌室必須穿工作服，戴口罩、帽子。 在各種操作進(jìn)程中均應(yīng)盡量避免或減少氣溶膠產(chǎn)生。 實(shí)驗(yàn)工作區(qū)禁止無關(guān)人員出入，尤其要嚴(yán)禁兒童進(jìn)入。 工作人員在處理傳染性物質(zhì)或動物之后，以及在離開實(shí)驗(yàn)室時要洗手。 凡發(fā)生溢漏事故或接觸傳染性物質(zhì)后，均應(yīng)立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室監(jiān)督員或?qū)嶒?yàn)室主任，并做好書面記錄及采取相應(yīng)措施。結(jié)核桿菌的培養(yǎng)及標(biāo)本涂片務(wù)必在生物安全柜里操作。 9. 有涉及感染性材料的操作應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，如結(jié)核桿菌培養(yǎng)、感染性組織等。 10. 工作人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)前，應(yīng)在專用的更衣室（或緩沖間）穿著背開式工作服或其它防護(hù)服。工作完畢后必須脫下工作服，不得穿工作服離開實(shí)驗(yàn)室?？稍俅问褂玫墓ぷ鞣仨毾认竞笄逑?。 11. 工作時必須戴手套（兩副為宜）。一次性手套必須先消毒后丟棄。 12. 在實(shí)驗(yàn)室中必須配備有效的消毒劑、眼部清洗劑或生理鹽水，且易于取用?？膳鋫鋺?yīng)急藥品。 作業(yè)指導(dǎo)書 細(xì)菌室內(nèi)質(zhì)控制度 文件編號： LAB－ SOP－ JX004 每位工作人員必須加強(qiáng)質(zhì)控意識，以質(zhì)量控制工作為核心，認(rèn)真做好各項(xiàng)質(zhì)控試驗(yàn)和記錄。 加強(qiáng)質(zhì)量控制和 專業(yè)理論知識的學(xué)習(xí)，規(guī)范操作，正確分析處理結(jié)果。 一旦發(fā)現(xiàn)失控，及時采取相應(yīng)措施，糾正失控結(jié)果。 每批自配或購置的培養(yǎng)基、生化鑒定等試劑必須用標(biāo)準(zhǔn)菌株 ATCC2785 ATCC2592 ATCC25922 質(zhì)控。合格方可使用，并作好記錄。 每周進(jìn)行藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制。對每批微量藥敏板、培養(yǎng)基、藥敏紙片必須用 ATCC2785 ATCC2592 ATCC25922 菌株進(jìn)行質(zhì)控，并做好記錄，出現(xiàn)問題及時分析，采用相應(yīng)措施。 每天觀察培養(yǎng)箱、 CO2 培養(yǎng)箱、冰箱的溫度，并做好記錄。 無菌間每周監(jiān)測一次，三氧機(jī)、紫 外線消毒滅菌情況，并做好記錄。 每三個月用 ATCC2785 ATCC2592 ATCC25922 菌株對全自動微生物分析儀進(jìn)行鑒定和藥敏質(zhì)量控制。 認(rèn)真討論、分析每次參加衛(wèi)生部室間質(zhì)評結(jié)果?？偨Y(jié)經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)。 作業(yè)指導(dǎo)書 臨床微生物及實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)院感染管理 文件編號： LAB－ SOP－ JX005 檢驗(yàn)科醫(yī)院感染管理應(yīng)達(dá)到以下要求 : 工作人員必須穿工作服 ,戴工作帽 ,必要時穿隔離衣，膠鞋，戴口罩 ,手套。 使用合格的一次性檢驗(yàn)用品 ,用后進(jìn)行無害化處理。 嚴(yán)格執(zhí)行無菌技術(shù)操作規(guī)程 ,靜脈采血必須一人一針一管一巾一帶 。微 量采血應(yīng)做到一人一針一管一片 。對每位病人操作前洗手或手消毒。 無菌物品如棉簽 ,棉球 ,紗布等及其容器應(yīng)在有效期內(nèi)使用 ,開啟后使用時間不得超過 24 小時 .使用后的廢棄物品 ,應(yīng)及時進(jìn)行無害化處理 ,不得隨意丟棄。 各種器具應(yīng)及時消毒 ,清洗 。各種廢棄標(biāo)本應(yīng)分類處理 (焚燒 ,入污水池 ,消毒或滅菌 )。 報(bào)告單應(yīng)消毒后發(fā)放。 檢驗(yàn)人員結(jié)束操作后應(yīng)及時洗手 ,毛巾專用 ,每天消毒。 保持室內(nèi)清潔衛(wèi)生 .每天對空氣 ,各種物表及地面進(jìn)行常規(guī)消毒 .在進(jìn)行各種檢驗(yàn)時 ,應(yīng)避免污染 。在進(jìn)行特殊傳染病檢驗(yàn)后 ,應(yīng)及時進(jìn)行消毒 ,遇有場地 ,工作服或體表污 染時應(yīng)及時處理 ,防止擴(kuò)散 ,并視污染情況向上級報(bào)告。 菌種、毒種按《傳染病防治法》進(jìn)行管理。 實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)院感染管理參照檢驗(yàn)科的管理要求 .實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)嚴(yán)格管理 ,防止逃逸或造成人與實(shí)驗(yàn)室動物的交叉感染 。實(shí)驗(yàn)后的動物必須焚化進(jìn)行無害化處理。 作業(yè)指導(dǎo)書 細(xì)菌室操作 技術(shù)規(guī)范 文件編號： LAB－ SOP－ JX006 細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)操作按全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程。 負(fù)責(zé)鑒定及簽發(fā)報(bào)告的主管技術(shù)人員應(yīng)通曉診斷細(xì)菌學(xué)的全面知識。 從事細(xì)菌專業(yè)技術(shù)人員，應(yīng)了解醫(yī)院監(jiān)測知識，掌握其檢測方法，定期統(tǒng)計(jì)分析醫(yī)院感染細(xì)菌分布，耐藥變 遷，并將其結(jié)果反饋臨床。 細(xì)菌室工作人員均應(yīng)具備細(xì)菌傳染、消毒、滅菌知識。 細(xì)菌專業(yè)人員不斷更新知識，了解細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)新進(jìn)展。 定期或隨時與臨床聯(lián)系，主動參與病例討論了解病情及治療情況，達(dá)到細(xì)菌檢驗(yàn)與臨床的密切聯(lián)系。 每天發(fā)出的微生物報(bào)告應(yīng)認(rèn)真復(fù)審，分析報(bào)告、評價(jià)報(bào)告。 工作人員加強(qiáng)有菌觀念，無菌操作。 當(dāng)工作環(huán)境被細(xì)菌污染，必須立即消毒處理，報(bào)告主管人員，采取必要措施。 10 工作人員被細(xì)菌培養(yǎng)物污染應(yīng)消毒處理，必要時給予藥物治療，并向主管負(fù)責(zé)人報(bào)告，采取特殊措施。 作業(yè)指導(dǎo)書 無菌間規(guī)章制度 文件編號： LAB－ SOP－ JX007 每一個工作人員必須樹立無菌觀念，嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作。 在無菌室內(nèi)必須戴帽子、口罩，進(jìn)行無菌操作。 每天早上 8： 00— 8： 30 用紫外線消毒或在凌晨 46 點(diǎn)用多功能機(jī)消毒 2 小時，每月檢查一次紫外燈的無菌效果。 無菌室內(nèi)各種廢棄物品必須煮沸消毒。 實(shí)驗(yàn)完畢后，用含氯制劑 1000mg/L 消毒桌面、地面。 作業(yè)指導(dǎo)書 菌（毒種）管理辦法 文件編號： LAB－ SOP－ JX008 1. 菌種保管應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，保存于冰箱中，房門專人加鎖，確保菌種安全。保管人員變動時，必須嚴(yán)格交接手續(xù)。 菌 種應(yīng)有嚴(yán)格的登記，包括形態(tài)，分離日期，鑒定日期，簽發(fā)者，主要鑒定性能（包括形態(tài)、染色、抗原結(jié)構(gòu)、動物致病力等），并注明使用、轉(zhuǎn)移、銷毀情況及原因。 各種菌種應(yīng)按規(guī)定時間接種，一般在接種三次后作一次全面的鑒定，注意菌種有無污染及變異，如發(fā)現(xiàn)變異時，應(yīng)及時更換。 菌種保存范圍及向外單位轉(zhuǎn)移，應(yīng)按國家衛(wèi)生部規(guī)定執(zhí)行。 所有存在菌種應(yīng)具備清單。 作業(yè)指導(dǎo)書 細(xì)菌室儀器維護(hù) 保養(yǎng)及質(zhì)控措施 文件編號： LAB－ SOP－ JX009 細(xì)菌室儀器維護(hù)保養(yǎng)及質(zhì)控措施 一、 BacT/Alert 120 、 BACTEC9050 血培養(yǎng)儀的維護(hù)、保養(yǎng)和質(zhì)控措施 ，儀器培養(yǎng)箱溫度的報(bào)告里外是否一致。 。 。 。 ，包括清潔外殼、瓶孔、濾網(wǎng)等 。 二、 Vitek3 BD 鳳凰全自動細(xì)菌鑒定和藥敏分析儀的維護(hù)、保養(yǎng)和質(zhì)控措施 是否正常。 ，質(zhì)控合格后才能用于臨床檢測。 。 ，包括清潔外殼、卡片架、濾網(wǎng)等 。 作業(yè)指導(dǎo)書 標(biāo)準(zhǔn)菌株保存及使用 文件編號： LAB－ SOP－ JX0010 標(biāo)準(zhǔn)菌株保存及使用 概述：標(biāo)準(zhǔn)菌株是細(xì)菌室室內(nèi)質(zhì)控工作必不可少的、重要的生物資源，我室的標(biāo)準(zhǔn)菌株主要來自省臨檢中心的發(fā)放和從衛(wèi)生部臨檢中心以及國家菌種保存中心購買所得，為了 讓標(biāo)準(zhǔn)菌株能夠得到合理的應(yīng)用，特制定以下規(guī)定。 ，包括菌種的菌名、編號、購買時間、保存地點(diǎn)、記錄人等 ，包括標(biāo)準(zhǔn)品的名稱、編號、使用時間等。 ，應(yīng)大量增殖，然后分裝在含 1015%甘油的胰蛋白胨肉湯中， 20℃ 以下保存。 ，如超過三次將不在視為標(biāo)準(zhǔn)菌株使用。 ，不得再次凍存。 作業(yè)指導(dǎo)書 細(xì)菌室內(nèi)務(wù)管理規(guī)定 文件編號： LAB－ SOP－ JX011 細(xì)菌室內(nèi)務(wù)管理規(guī)定 概述 鑒于細(xì)菌室工作瑣碎煩雜且千頭萬緒，為了使細(xì)菌室的工作能夠保質(zhì)保量地順利完成，特將細(xì)菌室暫定為兩個崗位，以明確工作范圍、增強(qiáng)責(zé)任心、便于日常工作的完成。當(dāng)然由于細(xì)菌室不同崗位工作量的隨機(jī)性較大，故我室要求大家發(fā)揚(yáng)既分工，又協(xié)作的精神，共同完成細(xì)菌室工作。 崗位職責(zé) 各崗位工作人員要求嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行操作，高質(zhì)量的完成本崗位工作，如遇到問題須提出經(jīng)討論解決。 崗位分工 崗位 Ⅰ ：完成細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本（ Ⅱ 號菌培養(yǎng)除外）的結(jié) 果觀察處理及報(bào)告發(fā)放。 崗位 Ⅱ ：完成儀器的維護(hù)、保養(yǎng)和質(zhì)控工作等。 環(huán)境條件 室內(nèi)溫度、濕度，每天一次，上午記錄。 恒溫設(shè)備 孵箱、普通冰箱，每天一次，上午記錄。 分析儀器 常規(guī)每日保養(yǎng)一次，發(fā)現(xiàn)問題隨時詳細(xì)記錄；質(zhì)控按要求測試完畢后，及時手工記錄， 標(biāo)本與結(jié)果 不合格標(biāo)本記錄、危急值報(bào)告記錄、結(jié)果記錄。 崗位記錄（附表：細(xì)菌室崗位記錄表） 其它記錄，如交班記錄等。 溫度 18～ 28℃ ，濕度 20～ 80％。 檢驗(yàn)科 作業(yè)指導(dǎo)書 細(xì)菌室內(nèi)務(wù)管理規(guī)定 文件編號： LAB－ SOP－ JX011 附表：細(xì)菌室崗位記錄表 細(xì)菌室崗位記錄表 日 期 崗位號 工作人員 日 期 崗位號 工作人員 附（崗位分工）： 崗位 Ⅰ ：完成細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本（ Ⅱ 號菌培養(yǎng)除外）的結(jié)果觀察處理及報(bào)告發(fā)放。 崗位 Ⅱ ：完成細(xì)菌室 Ⅱ 號菌培養(yǎng)處理、雜項(xiàng)工作（如肥達(dá)式試驗(yàn)、外斐氏試驗(yàn)等）及儀器的維護(hù)、保養(yǎng)和質(zhì)控工作等。 作業(yè)指導(dǎo)書 標(biāo)本采集及保存要求 文件編號： LAB－ SOP－ JX012 標(biāo)本采集及保存要求 1 總則：用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本在收集時應(yīng)注意嚴(yán)格無菌操作和及時送檢，檢測后標(biāo)本應(yīng)妥善保存。 下呼吸道分泌物（痰液） 令患者早上起床后用清水瀨口，不要刷牙，立即從下部呼吸道咳出第一口痰，吐在無菌塑料痰盒中，及時送檢。 尿液（中段尿） 護(hù)理人員協(xié)助采取中段尿約 3ml 入無菌試管中，及時送檢。 糞便：取有粘液、膿血部分的糞便置玻璃大便專用管中，如為稀水便，可直接收集于玻璃管中，及時送檢。 眼、耳、鼻、喉拭子：將棉拭子沾取少許無菌生理鹽水（如沾取的太多，可在無菌生理鹽水瓶壁上擠 去多余的水份），然后采取可疑部位的分泌物，倒懸于無菌試管內(nèi) ,及時送檢。 膿液：用沾有生理鹽水的棉拭子沾取膿液，要盡量多取一些，然后將棉拭置于無菌試管中，及時送檢。 血液： 凡懷疑菌血癥和敗血病的患者，采血培養(yǎng)時，應(yīng)盡量在未使用抗菌素前采血，如已使用抗菌素， 應(yīng)盡量選擇抗菌素在體內(nèi)濃度最低時采血，應(yīng)在病人第二次使用抗菌素之前采集血培養(yǎng)標(biāo)本。當(dāng)然在 病人發(fā)熱或寒顫時采集也可。 成人每次采血 5— 10ml，小兒采血 2— 3ml； 嚴(yán)格消毒病人采血部位和血培養(yǎng)瓶口，抽一定量血液 后，無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，輕輕搖勻， 從抽血到接種入瓶，動作要快，防止血液凝固，同時要及時送檢。 穿刺液：胸腹水、心包液、關(guān)節(jié)腔液、鞘膜積液： 嚴(yán)格無菌抽取