【正文】 苗傳遞系統(tǒng)的篩選:以殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、殼聚糖水凝膠和殼聚糖季銨鹽水凝膠為待選疫苗載體系統(tǒng),分別以甲型H1N1流感裂解病毒為疫苗抗原(4μg)與rIL1β(2μg)制備噴鼻組合物流感疫苗,同時(shí)以單抗原無佐劑組作為對照組,PBS組為空白組,分別免疫Balb/c小鼠,共免疫兩次,間隔時(shí)間為兩周。通過檢測小鼠血清中IgG效價(jià)、血抑效價(jià)(HI)和肺、鼻沖洗液中sIgA效價(jià),初步評價(jià)其有效性。結(jié)果表明,殼聚糖季銨鹽水凝膠作為噴鼻疫苗傳遞系統(tǒng)的作用好于殼聚糖、殼聚糖季銨鹽和殼聚糖水凝膠,可有效誘導(dǎo)產(chǎn)生機(jī)體的體液免疫和黏膜免疫。在此基礎(chǔ)之上,對殼聚糖季銨鹽水凝膠的用量進(jìn)行篩選,制備不同濃度 3 的水凝膠抗原組合物,使水凝膠與抗原的比分別為1:1:2和1:4,從結(jié)果可看出,當(dāng)水凝膠與抗原的比為1:1時(shí),疫苗免疫效果最佳。(2)噴鼻流感疫苗抗原的篩選:以甲型H1N1流感裂解病毒和滅活全病毒作為疫苗抗原,并分別以殼聚糖季銨鹽水凝膠作為疫苗傳遞系統(tǒng)(1:1)與rIL1β(2μg)制備噴鼻組合物流感疫苗,分別免疫Balb/c小鼠,共免疫兩次,間隔時(shí)間為兩周。通過檢測小鼠血清中IgG效價(jià)、血抑效價(jià)(HI)和肺、鼻沖洗液中sIgA效價(jià),對抗原進(jìn)行初步篩選。結(jié)果表明,與甲型H1N1流感滅活全病毒相比,甲型H1N1流感裂解病毒作為噴鼻疫苗的抗原引起的免疫應(yīng)答水平較好。(3)噴鼻流感疫苗黏膜佐劑的篩選:以IL1β、IL1IL3可溶性ViE為待選疫苗佐劑,各2μg劑量,分別與殼聚糖季銨鹽水凝膠傳遞載體與甲型H1N1流感裂解病毒抗原(4μg)以1:1比例充分混合,制備噴鼻流感疫苗,分別免疫Balb/c小鼠,共免疫兩次,間隔時(shí)間為兩周。通過血清檢測其IgG及其亞型抗體效價(jià)、血抑效價(jià),鼻、肺、陰道沖洗液的分泌型抗體效價(jià),篩選出最佳佐劑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,IL1β與其它幾種佐劑相比,疫苗佐劑效果較好,引起免疫應(yīng)答水平較高。重組人IL1β蛋白佐劑的制備及評價(jià):從健康人外周血中分離白細(xì)胞,提取其總RNA,并通過PTPCR方法獲得人源IL1β基因序列的cDNA序列,構(gòu)建表達(dá)載體pET24a(+)IL1β,在大腸桿菌DH5α中獲得了高效表達(dá)。對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,并優(yōu)化其表達(dá)及純化條件,最后檢定其表達(dá)量、純度、蛋白濃度和生物活性,以及其作為佐劑的有效性。結(jié)果表明,rIL1β誘導(dǎo)表達(dá)的最佳培養(yǎng)溫度為33℃,培養(yǎng)時(shí)間為24h,初步純化的NaCl洗脫濃度為20 mmol。 mg/mL,表達(dá)量大于30%,%,生物活性約為109個(gè)/mL。rIL1β蛋白佐劑效果評價(jià):取本實(shí)驗(yàn)制備的2μg IL1β蛋白佐劑,并用進(jìn)口商品化的的IL1β蛋白為對照,分別與殼聚糖季銨鹽水凝膠傳遞載體(1:1)與甲型H1N1流感裂解病毒抗原(4μg)充分混合,制備噴鼻甲型H1N1流感裂解疫苗,分別在0d、14d免疫Balb/c小鼠,共免疫兩次,通過檢測其血清中IgG抗體效價(jià)、血抑效價(jià),和鼻、肺沖洗液中sIgA效價(jià),初步評價(jià)rIL1β蛋白作為噴鼻疫苗佐劑的有效性。結(jié)果證明,所制備的重組IL1β蛋白產(chǎn)物可以有效增強(qiáng)噴鼻疫苗的免疫效價(jià),具有良好的黏膜佐劑效應(yīng)。噴鼻流感三價(jià)裂解疫苗的制備及初步評價(jià):以第一部分、第二部分研究結(jié)果為基礎(chǔ),選用殼聚糖季銨鹽水凝膠作為疫苗載體,rIL1β作為佐劑,制備季節(jié)性噴鼻流感三價(jià)裂解疫苗,并對其噴鼻免疫的效果進(jìn)行初步評價(jià)。以甲型H1N1流感裂解抗原、B型裂解抗原和H3N2裂解抗原分別制備單價(jià)疫苗和三價(jià)疫苗,使抗原佐劑的總體積與殼聚糖季銨鹽水凝膠的體積比為1:1,不足體積則用PBS溶液補(bǔ)全。以PBS組作為空白組,肌肉注射組為對照組,將以上噴鼻免疫Balb/c小鼠,分別在0d、14d免疫兩次。通過ELISA法對免疫前后的小鼠血清中和抗體、IgG抗體及其抗體亞型和鼻沖洗液、肺沖洗液中的sIgA抗體效價(jià)進(jìn)行對比檢測,比較三價(jià)疫苗與單價(jià)疫苗的免疫效價(jià)和交叉免疫效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),噴鼻流感三價(jià)疫苗組中動(dòng)物的血清中IgG抗體各亞型和HI效價(jià)顯著高于單價(jià)疫苗組,且低于肌注對照組。sIgA分泌型抗體效價(jià)和IFNγ、IL4分泌檢測結(jié)果均高于三種單價(jià)疫苗組和肌注對照組,說明噴鼻流感三價(jià)疫苗雖然在引起體液免疫方面不如肌肉注射疫苗,但是能有效且顯著地引起黏膜免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答,好于現(xiàn)有的注射流感裂解疫苗。結(jié)論: 本研究中,從傳遞系統(tǒng)、黏膜佐劑、抗原類型和免疫應(yīng)答效果四個(gè)方面,對噴鼻流感三價(jià)疫苗進(jìn)行了組合物的篩選和初步評價(jià)。研究發(fā)現(xiàn),①在噴鼻流感三價(jià)疫苗的小鼠模型中,殼聚糖季銨鹽水凝膠作為噴鼻疫苗傳遞系統(tǒng)的免疫增強(qiáng)效果好于殼聚糖、殼聚糖季銨鹽和殼聚糖水凝膠。②IL1β作為黏膜佐劑對噴鼻疫苗的免疫增強(qiáng)效果好于IL1IL33和水溶性ViE。4 ③流感裂解病毒作為疫苗抗原的免疫效果明顯好于滅活全病毒抗原。以上述篩選結(jié)果組成噴鼻甲型H1N1流感裂解疫苗,用4μg抗原經(jīng)0、14d兩次免疫后能夠誘導(dǎo)較理想的粘膜免疫和系統(tǒng)免疫應(yīng)答效果。此外,成功制備純度較高、具有生物活性且能增強(qiáng)噴鼻疫苗免疫效果的人源rIL1β蛋白佐劑,并通過實(shí)驗(yàn)證明其有較好的佐劑效果。以IL1β為佐劑的噴鼻流感三價(jià)裂解疫苗,不僅能夠較好的誘導(dǎo)黏膜免疫應(yīng)答,而且能夠誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答,從而為噴鼻流感三價(jià)裂解疫苗研究奠定了良好的基礎(chǔ),同時(shí)也為其它噴鼻疫苗的研制提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。2012第四屆中國獸藥大會(huì)作者單位：北京華都詩華生物制品有限公司要點(diǎn)：禽流感是由A型禽流感病毒引起的一種家禽和野生禽類感染的急性接觸性傳染病。每次禽流感暴發(fā)和流行尤其是高致病性禽流感(HPAI)的暴發(fā)和流行，都給養(yǎng)禽業(yè)生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。疫苗是防控禽流感的主要手段和措施。本文對禽流感疫苗的研究現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述。二．我公司在產(chǎn)產(chǎn)品的國內(nèi)外進(jìn)展國際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志2013年2期 作者單位 ：摘要：目前,凍干結(jié)束后在凍干箱內(nèi)自動(dòng)加塞,然后出箱軋蓋,解決了安瓿瓶的玻屑和在運(yùn)輸過程易碎的缺陷,這種工藝對保證制品質(zhì)量十分有益[1].研發(fā)報(bào)批時(shí)采用的進(jìn)口高硼硅西林瓶基本是代理公司代理銷售,價(jià)格偏高,售后及技術(shù)支持不如國內(nèi)企業(yè)便捷,不能大批量及時(shí)供貨,(甲肝)疫苗,研究了兩者對甲肝疫苗凍干后外觀、微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展2013年1期作者單位 ：摘要：目的：建立兩種甲型肝炎病毒抗原(HAVAg)檢測試劑盒, 生物素標(biāo)記甲型肝炎病毒抗體(HAVAb)與辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素聯(lián)合應(yīng)用建立甲型肝炎病毒抗原BAELISA檢測法；同時(shí)使用辣根過氧化物酶標(biāo)記HAVAb作放大系統(tǒng)建立雙抗體夾心甲型肝炎病毒抗原ELISA檢測試劑,對比兩種檢測方法的特異性、 用生物素標(biāo)記甲型肝炎病毒抗體辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素作放大系統(tǒng)建立的甲型肝炎病毒抗原BAELISA檢測法,較雙抗體夾心ELISA檢測方法靈敏度高1～2個(gè)稀釋度；兩種檢測法均對10余種病毒無交叉,P/ 甲型肝炎病毒抗原BAELISA檢測法是一種靈敏度高,特異性好,方便快捷的檢測方法,檢測靈敏度適中,操作簡單,北方藥學(xué)2012年5期作者單位 ：濟(jì)寧市藥品檢驗(yàn)所摘要：流行感冒是一種發(fā)病率和死亡率很高的呼吸系統(tǒng)疾病,中國獸藥雜志2012年12期