20xx年醫(yī)學(xué)專題—mtt法檢測(cè)細(xì)胞活力精講-文庫(kù)吧
2025-10-21 12:59 本頁(yè)面
【正文】 (xu225。nf)細(xì)胞操作步驟：,1）將細(xì)胞離心收集后，調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度大約1104/ml，每孔先加細(xì)胞懸液90ul,相應(yīng)梯度的藥物每孔10ul；共100ul加入到96孔板（邊緣孔用PBS填充）。每板設(shè)對(duì)照。同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對(duì)照孔（細(xì)胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。 2）置37℃，5%CO2孵育24小時(shí)，倒置顯微鏡下觀察。 3）每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），繼續(xù)(j236。x249。)培養(yǎng)4 h 4）每孔加三聯(lián)裂解液（10gSDS，異丁醇5ml，10M HCl 0.1ml用雙蒸水溶解配成100ml）過(guò)夜， 第二天早晨置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD570nm測(cè)量各孔的吸光值。,第七頁(yè)，共二十四頁(yè)。,藥物(y224。ow249。)的配制,濃度 體積(tǐjī) 過(guò)濾,第八頁(yè)，共二十四頁(yè)。,MTT的配制(p232。izh236。),MTT一般最好現(xiàn)用現(xiàn)配，過(guò)濾后4186。C避光保存兩周內(nèi)有效，或配制成5mg/ml保存在20度長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。尤其當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)就絕對(duì)不能再用了。 MTT有致癌性，用的時(shí)候小心,有條件(ti225。oji224。n)最好帶那種透明的簿膜手套.配成的MTT需要無(wú)菌，MTT對(duì)菌很敏感；往96孔板加時(shí)不避光也沒(méi)有關(guān)系，因?yàn)闀r(shí)間較短。,第九頁(yè)，共二十四頁(yè)。,實(shí)驗(yàn)(sh237。y224。n)結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,所有數(shù)值以x177。s表示，應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，p0.05時(shí)為相差顯著，p0.01時(shí)為相差非常(fēich225。ng)顯著?？梢砸詴r(shí)間為橫軸，光吸收值為縱軸繪制細(xì)胞生線曲線，專門(mén)公式求IC50（半數(shù)抑制濃度 ）。或計(jì)算抑制率。 OD對(duì)照組OD實(shí)驗(yàn)組 抑制率 % = OD對(duì)照組,100 %,第十頁(yè)，共二十四頁(yè)。,實(shí)驗(yàn)結(jié)果(jiē guǒ)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,公式如下(rxi224。)： lgIC50=XmI(P(3PmPn)/4) Xm:lg 最大劑量 I:lg(最大劑量/相臨劑量) P:陽(yáng)性反應(yīng)率之
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