分子生物學(xué)技術(shù)-文庫吧
2024-12-22 03:23 本頁面
【正文】 儲藏在基因中的遺傳信息分轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯兩步進行表達，這種遺傳信息從 DNA到 RNA再到蛋白質(zhì)的流向，在所有的細胞類型中都是受到高度調(diào)節(jié)的，同時在有些情況下也是嚴(yán)格協(xié)同的?；虮磉_的此種嚴(yán)格調(diào)控機理，保證細胞不會浪費能量用于合成它所不需要的基因產(chǎn)物。 從基因研究上，操縱子概念比順反子又進了一步。即基因不但在結(jié)構(gòu)上是可分的，而且在功能上也是有分工的。同時，有的基因控制蛋白質(zhì)產(chǎn)物的合成，而有的基因并沒有直接的產(chǎn)物。 操縱子模型 二、核酸探測技術(shù) （一）指紋圖譜 （二）核酸分子雜交 （一）、指紋圖譜 指紋圖譜： 即核酸酶切圖譜，對生物的蛋白質(zhì)、 DNA和 RNA進行分析的電泳圖、雜交放射性自顯影圖等。在微生物研究上，主要是用限制性內(nèi)切酶（ ERA） 對病毒、細菌 DNA進行酶切分析的圖譜。 原理： 在微生物（細菌）細胞中有 1種限制性內(nèi)切酶類（ II， 稱為 RE）， 能特異性的識別和切割 DNA鏈上特定的一段 DNA片段，這類酶廣泛應(yīng)用于基因工程的各個方面。 ERA就是用 RE消化病毒或細菌的 DNA或質(zhì)粒，將消化物于瓊脂凝膠中電泳分離，經(jīng) 溴化乙錠（ EB） 染色，然后分析 DNA酶切片段的數(shù)目、遷移率等分析微生物的變異現(xiàn)象、鑒定毒株、分型及了解基因結(jié)構(gòu)和進行流行病學(xué)研究等等。 方法： 酶切 、照相 核酸探針技術(shù) 前言 (一 ) 核酸探針的種類 (二 ) 核酸探針的制備 (三 ) 核酸雜交 (四 ) 核酸探針技術(shù)在動物檢疫中的應(yīng)用 前言 化學(xué)及生物學(xué)意義上的探針 (probe)， 是指與特定的靶分子發(fā)生特異性相互作用，并可被特殊的方法探知的分子?？贵w 抗原、生物素 抗生物素蛋白、生長因子 受體的相互作用都可以看作是探針與靶分子的相互作用。 核酸探針技術(shù)原理是堿基配對?；パa的兩條核酸單鏈通過退火形成雙鏈，這一過程稱為核酸雜交。（基本過程是：加熱變性 降溫復(fù)性。）核酸探針是指帶有標(biāo)記物的已知序列的核酸片段，它能和與其互補的核酸序列雜交，形成雙鏈，所以可用于待測核酸樣品中特定基因序列的檢測。每一種病原體都具有獨特的核酸片段，通過分離和標(biāo)記這些片段就可制備出探針，用于疾病的診斷等研究。 (一 ) 核酸探針的種類 可將核酸探針分為基因組 DNA探針、 cDNA探針、 RNA探針和人工合成的寡核苷酸探針等幾類。 作為診斷試劑，較常使用的是基因組 DNA探針和 cDNA探針。其中，前者應(yīng)用最為廣泛，它的制備可通過酶切或聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)從基因組中獲得特異的 DNA后將其克隆到質(zhì)?；蚴删w載體中，隨著質(zhì)粒的復(fù)制或噬菌體的增殖而獲得大量高純度的DNA探針。 將 RNA進行反轉(zhuǎn)錄，所獲得的產(chǎn)物即為cDNA。 cDNA探針適用于 RNA病毒的檢測。cDNA探針序列也可克隆到質(zhì)粒或噬菌體中，以便大量制備。將信息 RNA(mRNA)標(biāo)記也可作為核酸分子雜交的探針。但由于來源極不方便，且 RNA極易被環(huán)境中大量存在的核酸酶所降解，操作不便，因此應(yīng)用較少。用人工合成的寡聚核苷酸片段做為核酸雜交探針應(yīng)用十分廣泛，可根據(jù)需要隨心所欲合成相應(yīng)的序列，可合成僅有幾十個 bp的探針序列，對于檢測點突變和小段 堿基的缺失或插入尤為適用 分 有放射性標(biāo)記探針和非放射性標(biāo)記探針兩大類。放射性標(biāo)記探針用放射性同位素做為標(biāo)記物。放射性同位素是最早使用，也是目前應(yīng)用最廣泛的探針標(biāo)記物。常用的同位素有 32P、 3H、 35S。 其中，以 32P應(yīng)用最普遍。放射性標(biāo)記的優(yōu)點是靈敏度高，可以檢測到 Pg級；缺點是易造成放射性污染，同位素半衰期短、不穩(wěn)定、成本高等。因此，放射性標(biāo)記的探針不能實現(xiàn)商品化。目前，許多實驗室都致力于發(fā)展非放射性標(biāo)記的探針。 目前應(yīng)用較多的非放射性標(biāo)記物是生物素(Bi
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