北京大學單分子與納米生物學實驗室-文庫吧
2024-12-20 02:17 本頁面
【正文】 ，會同時導致散射光和熱量的增多 強光源照射，容易使樣品產生光化分解 強光源需要的穩(wěn)壓穩(wěn)流裝置復雜而昂貴 產生大量臭氧，損害健康 對于光源要注意以下幾點 :（ 1）正負極不要接錯。（ 2） 拿燈時，不要碰窗口，以免手上的油污經紫外照射后，難以清除。 應及時用無水乙醇擦干凈。（ 3） 燈有壽命，要節(jié)約使用。（ 4） 啟動間隔一般要大于半小時，待燈冷卻后，在重新啟動。 啟動后要預熱 半小時。（ 5） 不要用眼睛直視燈。2 樣品池在可見可用玻璃池，但紫外區(qū)一定要用石英池。（ 1）設置空白對照 。 （ 2）清洗問題，關鍵是即時沖洗。自來水沖洗 SDS浸泡 雙蒸水沖洗濃硝酸處理 雙蒸水沖洗（二）熒光分光光度術中的參量?ex— Maximum excitation wavelength ?em, ?max — Maximum emission wavelengthA 熒光強度的定義：在一定激發(fā)波長 (λex)作用下，發(fā)射的 熒光強弱。 F=Ia? Ia=I0I， I=I010εcL F = ? I0(110εcL ) {當 C很低時 F= ? I0εcL ， {當 C較大時 F=I0? B ?=發(fā)射光子數 /吸收光子數 2 熒光強度（ fluorescence intensity, F, I ）與 量子產率（ quantum yield, ? ）（二）熒光分光光度術中的參量熒光強度與濃度的關系3 熒光偏振 ( fluorescence polarization)（二）熒光分光光度術中的參量自然光 部分偏振光 偏振光I//I?I//+I?P=I//I?I//+2I?A=熒光偏振度 Fluorescence polarization p 熒光各向異性 Fluorescence anisotropy A(1) 熒光偏振度的物理意義：A ： I//=I? ， P=0，自然光，熒光分子運動很快，取 向隨機。（稀溶液）B： I//或 I?為 0 ， P=177。1 偏振光，熒光分子運動很慢，取向有序。C： I//?I? ? 0 ， 0P1，生物大分子的熒光屬于這種情況。(2) 環(huán)境因素及分子運動對熒光偏振度的影響 A .溫度的影響：溶液粘度 A：溫度的影響 溫度升高， P降低 B：溶液粘度 粘度升高， P升高C：分子的運動 — 轉動旋轉弛豫時間 rotational relaxation time — ?（二）熒光分光光度術中的參量4 熒光壽命 （ Fluorescence liftime ?） 熒光衰減為原來激發(fā)時最大熒光強度的 1/e所需要的時間I=I0ekt , ?=1/k 分子所處的環(huán)境有無淬滅有無能量轉移有無分子間相互作用影響因素5 熒光探劑(1)具有環(huán)狀共軛雙鍵即 π電
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