【正文】 組織迅速冷凍后取出用鋁箔包好編號(hào)存 入液氮罐或 70度低溫冰箱保存?？纱? 數(shù)月至數(shù)年。注意：新鮮標(biāo)本不能放入 10度 冰箱緩慢冷卻，否則組織內(nèi)水份可被逐漸析出 結(jié)晶而破壞細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu)，影響觀察。組織 塊復(fù)溫時(shí)，應(yīng)在 37℃ 度加溫速融，自然復(fù)溫將 造成組織破壞。 ? 固定方法 將組織浸入某些化學(xué)試劑，使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)盡量接近其生活狀態(tài)時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置，這一過程稱“固定”。根據(jù)需要選擇不同的固定液。甲醛、四氧化鋨 ….. 等固定。 固定時(shí)間： 大多數(shù)組織應(yīng)固定 624小時(shí)，加熱可使蛋白質(zhì)凝固，一般不要求加熱固定，冷凍切片常加熱固定。 ? 注射、灌注固定法 組織過大、整個(gè)臟器或動(dòng)物的固定。 肺切除標(biāo)本，可經(jīng)氣管或支氣管注入固定液。 肝腎可從相應(yīng)的動(dòng)脈注入固定液。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可通過左心室進(jìn)行灌注固定，使全身各組織臟器都得到良好固定。 細(xì)胞涂片的固定方法 浸入法 將新鮮而濕潤(rùn)的涂片直接浸入固定液內(nèi)，但應(yīng)注意交叉污染。 滴加法 將固定液滴加在平放的玻片上，待自然揮發(fā)干燥后染色。 ? 固定液 單純固定液： 甲醛一般為 10%濃度（ 40%甲醛 9： 1混合而成） 苦味酸 糖類 醋酸 保存染色體結(jié)構(gòu)較好。 鉻酸 三氧化鉻水溶液。線粒體和高爾基體 鋨酸 脂類固定劑 丙酮 用于各種酶的固定 酒精 固定速度慢，固定糖原，如肝、阿米巴 原蟲，尤文氏瘤糖原固定。 ? 混合固定液 50種左右， carnoy液 —胞核、胞漿固定，顯示 DNA、 RNA效 果好。也用于尼氏體固定。 組織病理學(xué)制片技術(shù) ? 組織脫水、透明、浸蠟 脫水 酒精、丙酮、異丙醇。 透明或媒浸 二甲苯、苯、四氯化碳、氯仿。 浸蠟 石蠟 組織包埋 1. 常規(guī)石蠟包埋和快速石蠟包埋 2. 樹脂包埋 3. 塑料包埋 組織包埋 1。常規(guī)石蠟包埋和快速石蠟包埋 2。樹脂包埋 電鏡 3。塑料包埋 光鏡、切片薄 ? 組織切片 石蠟切片 振動(dòng)切片 —振動(dòng)切片機(jī)，將新鮮組織不固定，不冰凍切成厚 20100um切片。用漂染法在反應(yīng)板進(jìn)行免疫組化染色，而后在解剖顯微鏡下檢出免疫反應(yīng)陽性部位。后固定，再按電鏡樣本制備超薄切片。可較好保存脂溶性物和細(xì)胞膜抗原，用于顯示神經(jīng)系統(tǒng)抗原分布。 適宜免疫電鏡觀察 :超薄切片 ? 染色 蘇木精 伊紅染色（ hematoxylineosin HE) 細(xì)胞核：蘇木精 +DNA 以離子鍵結(jié)合而被染色 細(xì)胞漿：蛋白質(zhì)為兩性物，染色與 PH值密切相關(guān)伊紅是酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽離子）結(jié)合而使細(xì)胞漿染色，呈不同程度的紅色。 This is the normal appearance of small intestinal mucosa ? 特殊染色 組織染色 Masson: 結(jié)締組織、膠原、肌肉 Reticular fiber: PAS:過碘酸 Schiff染色：糖原 AB:黏液 特殊病理沉積物 剛果紅：淀粉樣物 病原微生物 六胺銀：真菌 wathinatarrg胃幽門彎曲菌 內(nèi)分泌細(xì)胞 六胺銀 不同病理學(xué)診斷技術(shù)的應(yīng)用及評(píng)價(jià) ? 腫瘤的診斷方面 ， 現(xiàn)在許多新技術(shù)如流式細(xì)胞分析 、 免疫組織化學(xué) 、 形態(tài)定量分析 、 分子遺傳學(xué)等技術(shù)的價(jià)值已被充分證實(shí) ， 為腫瘤的診治提供了大量有用的信息 ， 為癌癥診療水平提高起到了很大的推動(dòng)作用 ， 但在這些檢測(cè)參數(shù)的評(píng)估中 ，常常有明顯的例外 ， 應(yīng)記住所有新技術(shù)都需要依據(jù)組織病理學(xué)診斷這個(gè)金標(biāo)準(zhǔn)去評(píng)價(jià) 、 認(rèn)定較新的診斷方式是否更有客觀性 。 常用的腫瘤病理學(xué)診斷技術(shù)從大的方面包括 ① 病理組織學(xué)檢查 ， ②病理細(xì)胞學(xué)檢查兩種 。 一 、 病理組織學(xué)檢查 （ 一 ） 常規(guī)石蠟切片 ? 石蠟切片是病理學(xué)中最常用的制片方法 ， 各種腫瘤病理標(biāo)本福爾馬林固定后 ， 經(jīng)取材 ﹑ 再固定 、脫水 ﹑ 浸蠟 ﹑ 包埋 ﹑ 切片和染色等 ， 24小時(shí)即可完成全部制片過程 ， 3天左右就可作出病理診斷 。石蠟切片的優(yōu)點(diǎn)是取材可以廣泛而全面 ， 制片質(zhì)量較穩(wěn)定 ， 閱片較容易 。 適用于穿刺活檢 、 切取活檢 、 內(nèi)鏡活檢和手術(shù)切除標(biāo)本的檢查 。 所有手術(shù)中作過冷凍切片診斷的腫瘤組織 ， 必須再作石蠟切片核實(shí)診斷和進(jìn)一步確定組織學(xué)類型 。 目前為止 ， 應(yīng)用常規(guī)石蠟組織切片診斷 ， 仍然是各種癌癥最可靠 、 最常用的手段 。 （ 二 ） 快速石蠟切片 快速石蠟切片是將上述常規(guī)制片過程簡(jiǎn)化 ，并在加溫下快速進(jìn)行 。 現(xiàn)常用微波或超聲波加熱固定 ， 丙酮脫水 ， 軟蠟浸蠟后 ， 將組織包埋成蠟塊再切片 ， 每一組織的全部制片過程僅 20～ 40分鐘左右 。 此法優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單 ， 切片質(zhì)量與常規(guī)石蠟切片近似 ， 可適用于活檢的小標(biāo)本 ， 如果組織過大 ， 切片質(zhì)量會(huì)受影響 。 目前也有部分醫(yī)院應(yīng)用快速石蠟切片作術(shù)中病理診斷 ， 但作出病理診斷的時(shí)間比冰凍切片稍長(zhǎng) 。 （ 三 ） 冷凍切片 先將需要制片的組織通過各種方法快速冷凍成硬塊 ， 然后再切片 、 染色 。 冷凍切片材料為手術(shù)中切除或活檢的新鮮標(biāo)本 ， 亦可是超低溫保存的新鮮組織 。 手術(shù)中病理診斷最主要目的是確定病變性質(zhì) ， 為手術(shù)醫(yī)生決定進(jìn)一步的手術(shù)方案提供病理信息 。 材料可以是切除的腫塊 、 局部淋巴結(jié)及腫瘤切緣等 。 1． 冷凍切片技術(shù)包括有： ① .液化氣體冷凍法：氯乙烷 ﹑ 二氧化碳 ﹑ 丁烷以及液氮等 ， 將其直接噴射在組織塊和切片刀上 ， 待組織凍結(jié)均勻及切片刀冷卻后立即切片 ， 然后染色 ， 全部過程約 20分鐘 ， 由于制片質(zhì)量不穩(wěn)定 ， 目前使用這種方法用于診斷的較少 。 ② 半導(dǎo)體冷凍法：以半導(dǎo)體制冷臺(tái)通電后所形成的溫差制冷 ， 使置于冷凍臺(tái)上的組織變硬然后再切片 ， 通常 20分鐘可作出診斷 ，這種方法成本低 ， 較適合基層醫(yī)院 ， 但速度稍慢 ，冷凍效果欠佳 。 ③ 恒冷切片法：低溫恒冷切片機(jī)是目前最先進(jìn)的冷凍切片機(jī) ， 切片過程均在恒冷箱內(nèi)進(jìn)行 ， 溫度可以根據(jù)需要調(diào)節(jié) ， 單個(gè)組織塊約 15分鐘可制備出病理切片 ， 制片質(zhì)量明顯高于前兩種冷凍制片法 ， 而且穩(wěn)定性好 。 2． 冷凍切片診斷的可靠性：一直是困繞病理醫(yī)生的重要問題 ， 對(duì)術(shù)中腫瘤冷凍切片的病理診斷 ，病理報(bào)告有以下三種結(jié)果 。 ? ① 正確診斷 。 冷凍切片診斷結(jié)果與石蠟切片診斷結(jié)果完全符合或基本符合 ， 良惡性質(zhì)無誤 ， 組織學(xué)類型可以有偏差 。 ? ② 誤診：包括出現(xiàn)假陰性和假陽性 。 從國(guó)內(nèi)外大量冷凍切片診斷資料看 ， 術(shù)中冷凍切片診斷確診率在 95%～ %。 誤診病例主要為假陰性較多 。 ? ③不能確診：在良惡性難辨，疑似癌或惡性待排除等不能確診的情況下只能延遲診斷等石蠟切片結(jié)果作出確診診斷 ? 國(guó)內(nèi)外部分單位冰凍切片診斷準(zhǔn)確與誤診情況：301醫(yī)院 7190例中確診 6936例 （ %）