【正文】 以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標記的樣品雜交，通過對雜交信號的檢測分析，即可得出樣品的遺傳信息（基因序列及表達的信息）的技術，常用計算機硅芯片作為固相支持物。 61. PCR/單鏈構象多態(tài)性分析（SSCP）：PCR產物變性后，經聚丙烯酰胺凝膠電泳，正?；蚝妥儺惢虻挠捎跇嬒蟮牟煌蚨w移位置不同，借此可分析確定致病基因的存在，常用于點突變的檢測。 62. 基因連鎖分析：將與致病基因連鎖的某種多態(tài)性標志作為遺傳標志，在同一個家系成員中探查是否存在致病基因的方法。 63. 三鏈DNA:一些DNA或RNA寡核苷酸片段能特異結合在的DNA的大溝中，并與富含嘌呤鏈上的堿基形成氫鍵，這樣的結構稱為三鏈DNA。 64. 信息分子：攜帶生物信號，在細胞之間進行傳遞的小分子化學物質。又稱為第一信使。 5 分子生物學考試寶典（私房版） 65. 受體：靶細胞中能夠特異性結合外源信號分子，并將信號傳至細胞內產生生物效應的蛋白質。與受體呈特異性結合的信號分子稱為配體。受體可分為膜受體和細胞內受體，其作用特點是：高度特異性，高親和力，可飽和性，可逆性，放大效應 66. G蛋白：即鳥苷酸結合蛋白，是由α、β、γ三個亞基構成的異源三聚體，另一類G蛋白為小分子單體G蛋白。G蛋白具有結合GDP或GTP的能力，并有催化GTP成GDP的活性，廣泛存在各種組織細胞膜上，在受體和效應蛋白間起傳遞信息的作用。 67. YAC(酵母人工染色體)：是由酵母染色體和質粒的一部分構建而成，包含了中心粒、端粒、復制元件和篩選標記等序列。這種載體能插入大片段DNA，一般認為攜帶1Mb的插入片段，主要是用來構建大片段 DNA 文庫。 68. 粘粒（cosmid）：是由大部分質粒序列包括復制原點、抗性標記等和噬菌體的cos粘端序列構建而成，可攜帶較長的DNA插入片段（40～50kb）。粘?？梢韵袷删w一樣被包裝成λ粒子。 69. 探針：指用放射性核素或其他標記物標記的核酸片段，具有特定的序列，能與待測核酸片段互補結合，可用于檢測核酸樣品中的特定基因?？煞譃镈NA探針、cDNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針。 70. 基因治療：一般是指將限定的遺傳物質轉入患者特定的靶細胞，以最終達到預防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的的治療方法。 6 分子生物學考試寶典（私房版） 問答題 一、病毒、原核、真核基因組的特點 1）病毒基因組較小，是單倍體； 2）形式多樣：病毒基因組有的是DNA，有的是RNA，但只含一種核酸。結構上可以是雙鏈、單鏈、環(huán)狀、線性分子； 3）RNA病毒基因組可以是數條不相連的RNA鏈組成：如流感病毒基因組RNA有8個RNA分子組成； 4）存在基因重疊：不僅存在結構基因重疊，也存在編碼區(qū)和調控區(qū)重疊； 5）可形成多順反子mRNA； 6）噬菌體基因連續(xù)，而真核細胞病毒基因是不連續(xù)的。 1）通常由環(huán)狀雙鏈DNA分子組成，只有一個復制起點； 2）具有操縱子結構，轉錄產物為多順反子； 3）絕大多數為單拷貝（編碼rRNA的基因有多個拷貝）； 4）編碼區(qū)所占比例較大（大于真核小于病毒），且重復序列很少； 5）含有編碼同工酶的同基因； 6）不同原核生物基因組GC含量變化大，可用于鑒別細菌種類； 7）細菌基因組中的可移動成分能產生轉座現象； 8）細菌染色體外存在質粒DNA。 1）真核生物基因組遠大于原核生物基因組，結構復雜，基因數龐大，有多個復制起點； 2）由染色體DNA和線粒體DNA組成； 3）非編碼序列多于編碼序列，編碼序列僅占3％左右； 4）存在大量重復序列； 5）結構基因多為斷裂基因，有內含子和外顯子組成； 6）轉錄產物為單順反子； 7）存在多基因家族和假基因； 8）體細胞為雙倍體，而精子和卵子為單倍體。 7 分子生物學考試寶典（私房版） 二、DNA損傷因素及機制 1）形成胸腺嘧啶二聚體，影響雙螺旋結構，使復制和轉錄受阻； 2）引起DNA間交聯(lián)，DNA與蛋白質交聯(lián)，甚至DNA鏈斷裂。 1）導致堿基變化：電離輻射產生的自由基可導致堿基氧化修飾、過氧化物形成、堿基破壞和脫落； 2）導致脫氧核糖變化：自由基導致脫氧核糖分解； 3）導致DNA鏈斷裂：直接或間接使脫氧核糖破壞或磷酸二酯鍵斷開而導致DNA斷裂； 4）引起DNA交聯(lián)：包括DNADNA交聯(lián)和DNA蛋白質交聯(lián)。 1）導致堿基烷基化，影響堿基配對； 2）導致堿基脫落，造成子代DNA序列改變； 3）導致DNA鏈斷裂； 4）導致DNA交聯(lián)。 、修飾劑引起堿基對的改變 1）復制時產生堿基錯配； 2）修復時產生堿基錯配； 3）堿基自發(fā)改變導致DNA損傷：如互變異構移位、脫氨基、堿基丟失。 ：如吖啶類化合物的插入，生物氧化的自由基與DNA發(fā)生加成和小自由基反應等。 三、DNA的損傷修復機制 1）一些DNA斷裂口在連接酶作用下可直接修復； 2）二聚體可被光復活酶直接修復； 3）烷基化堿基可通過O6甲基鳥嘌呤甲基轉移酶、Ada酶直接修復。 1）單個堿基切除修復：特定DNA糖苷酶識別并切除受損堿基→AP核酸內切酶在無堿基部位將DNA鏈的磷酸二酯鍵切開→外切核酸酶 8 分子生物學考試寶典（私房版） 切除脫氧核糖殘基→DNA聚合酶和連接酶修復缺口； 2）核苷酸片段切除修復：先由一個酶系統(tǒng)識別損傷部位，然后在損傷兩側各水解一個磷酸二酯鍵，釋放一段核苷酸，最后在DNA聚合酶和連接酶修復損傷區(qū)。 ：是DNA損傷較多時采取的修復方式，是先進行復制再進行切除修復。包括同源重組和非同源重組。 ：是DNA損傷嚴重時的應急性修復方式，人類細胞未發(fā)現這種修復系統(tǒng)。 ：這是真核生物誘導修復的主要機制，通過該機制可以誘導修復基因轉錄，或暫時阻斷細胞周期，或誘導細胞凋亡。 四、基因突變的遺傳效應 ：發(fā)生堿基取代、缺失、插入都會引起DNA堿基組成和排列順序的改變，但就轉錄、翻譯合成蛋白質而言，基因突變會產生多種遺傳效應。 1）錯義突變：因為DNA分子中堿基的取代，導致轉錄翻譯后蛋白質氨基酸組成和排列順序發(fā)生改變。 2）無義突變：由于堿基被取代、缺失或插入，使原來的氨基酸密碼子變成終止密碼子，翻譯后形成一條切短了的、不完全的多肽，使蛋白質生物活性和功能發(fā)生改變。 3）同義突變：雖然基因結構中有堿基取代，但由于遺傳密碼的簡并性，而不引起蛋白質氨基酸組成和排列順序發(fā)生任何改變。 4）移碼突變：基因堿基序列中發(fā)生單個核苷酸、數個核苷酸的缺失或插入，或核苷酸片段的缺失或插入，導致突變區(qū)域后的閱讀框移位。如果插入或缺失核苷酸是3的整數倍，合成多肽鏈就會增加或減少一個或數個氨基酸。如果插入或缺失核苷酸不是3的整數倍，突變區(qū)域后合成的氨基酸將完全改變，還重新產生終止密碼子，影響多肽長度，嚴重影響蛋白質的結構、理化性質和生物功能。 ：如果真核生物基因突變發(fā)生在hnRNA的剪接位點上，導致剪接位點消失或產生新的剪接位點都將導致蛋白質表達產物的異常，改變相應的生物性狀。 五、原核、真核基因表達特點 ：1）操縱子模型普遍性；2）阻遏蛋白與阻遏機制普遍性；3）σ因子決定RNA聚合酶識別特異性；4）轉錄和翻譯過程耦聯(lián)，產物為多順反子；5）僅一種RNA聚合酶，轉錄所有基因；6） tRNA和rRNA前體需要加工修飾，mRNA不需加工就可直接作為蛋白質合成模板；7）起始tRNA 9 分子生物學考試寶典（私房版） 攜帶的是甲酰蛋氨酸（fMet）可有多個起始部位，同時合成不同蛋白；8）核糖體直接結合到AUG部位 ：1）轉錄和翻譯分開，產物為單順反子，轉錄產物需進行加工；2）轉錄激活主要受順式作用元件和反式作用因子相互作用調節(jié)；3）有3種RNA聚合酶，分別轉錄不同RNA；4）起始tRNA攜帶的是蛋氨酸，就一個起始部位；5）核糖體結合與“帽子”結構，掃描找到AUG。 六、乳糖操縱子的作用機制 乳糖操縱子（lac operon）含Z、Y、A三個結構基因，分別編碼β半乳糖苷酶、透酶、乙?；D移酶。結構基因上游有一個操縱元件（O）和一個啟動子（P），啟動子上游有一個CAP（分解代謝物基因激活蛋白）結合位點。啟動子、操縱元件和CAP結合位點共同構成了Lac操縱子的調控區(qū)。I基因是調節(jié)基因，可編碼產生阻遏蛋白，在沒有乳糖的條件下與操縱元件結合，操縱元件與啟動子有部分重疊，從而抑制結構基因的轉錄。 在乳糖存在時，乳糖經透酶作用進入細胞，在由β半乳糖苷酶催化生成半乳糖。半乳糖可作為誘導劑與阻遏蛋白結合，導致阻遏蛋白構象改變與操縱元件解離，解除對結構基因轉錄的抑制。 Lac啟動子是弱啟動子，與RNA聚合酶結合能力弱，需要CAP對其進行正調控。當環(huán)境中由以葡萄糖為主轉變?yōu)橐匀樘菫橹饕荚磿r，cAMP濃度升高，與CAP結合，使CAP發(fā)生變構，從而可以與CAP結合位點結合，激活RNA聚合酶活性，啟動結構基因轉錄，加速合成分解乳糖的3種酶。 七、色氨酸操縱子的作用機制 色氨酸操縱子（trp operon）是一種阻遏型操縱子，含E、D、C、B、A五個結構基因，編碼色氨酸合成相關酶。上游調控區(qū)由啟動子（P）和操縱元件（O）組成。R是調節(jié)基因，編碼阻遏蛋白，在細胞內有大量色氨酸存在時與操縱元件結合，抑制轉錄，無色氨酸時則不結合，啟動轉錄。 trp操縱子的另一個調控方式是衰減機制調節(jié)。衰減子位于結構基因E和操縱元件之間的L基因中。衰減子轉錄物有片段4四個序列互補區(qū)，相鄰之間可形成發(fā)夾結構。4形成發(fā)夾結構后緊跟著寡尿嘧啶，是不依賴ρ因子的轉錄終止信號。L編碼的14個氨基酸短肽序列中有兩個相鄰的色氨酸密碼子，位于片段1內。由于細菌轉錄翻譯偶聯(lián)，當細胞中有色氨酸時可以形成色氨酰tRNA，核糖體可迅速通過相鄰兩個色氨酸位點，封閉片段2，致使片段4 10 分子生物學考試寶典（私房版） 形成發(fā)夾結構，終止轉錄。當細胞中色氨酸缺乏時，核糖體就滯留在兩個色氨酸密碼子位點，片段3可形成發(fā)夾結構，不影響結構基因的繼續(xù)轉錄。 八、反式作用因子結構域，模體及其特點 反式作用因子一般具三個功能結構域：DNA結合域、轉錄活性域、結合其他蛋白的結合域。與DNA結合的模體主要有： ：該結構域中含有較多的半胱氨酸（Cys）和組氨酸（His）的區(qū)域，借肽鏈的彎曲使2個Cys 和2個His或4個Cys與一個鋅離子絡合成的指狀結構。具有鋅指結構的反式作用因子都含有幾個相同的鋅指結構，每個指結構的指尖部分可以進入DNA雙螺旋的大溝或小溝。 ：很多反式作用因子結合DNA的結構域中具有一段60左右個氨基酸組成的保守的螺旋回折螺旋結構區(qū)域，稱為同源結構域，其螺旋區(qū)域能夠進入DNA雙螺旋的大溝，與堿基結合。 ：有些反式作用因子結合DNA結構域中有一段約30個氨基酸組成的核心序列，每個6個氨基酸殘基有規(guī)律的出現1個亮氨酸殘基，能夠形成兩性α螺旋，一端為富含堿性氨基酸的親水的堿性區(qū)域，一端為成行亮氨酸構成的疏水區(qū)（亮氨酸拉鏈區(qū)），兩個具有亮氨酸拉鏈區(qū)的單體以疏水力相互作用就形成了亮氨酸拉鏈，其堿性區(qū)域可以結合DNA。 （HLH）：這種結構能形成兩端具有兼性的α螺旋，螺旋間由不同長度的環(huán)連接。緊靠螺旋區(qū)N端有一段富含堿性氨基酸的序列可與DNA結合。含有該結構的反式作用因子（如與免疫球蛋白κ鏈基因增強子結合的E12和E47）易通過螺旋區(qū)形成二聚體。 ：該結構含有高密度的堿性氨基酸，能與DNA結合，但無鋅指結構、同源結構和亮氨酸拉鏈結構。 九、真核生物轉錄水平的調控機制 真核生物轉錄