【正文】 劑盒， C 反應蛋白產(chǎn)品的注冊檢測應主要包括以下性能指標：外觀檢查、物理檢查、準確度、線性范圍、分析 靈敏度 /檢出限（空白限）、精密度（批間、重復性）、校準品溯源性、質(zhì)控品測量準確度及均一性、生物安全性（如適用）等。如果擬申報試劑已有相應的專用國家 /行業(yè)標準或相應方法學的通用標準要求發(fā)布，則企業(yè)標準的要求不得低于上述標準要求。 （四）注冊檢驗根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應該在國家食品藥品監(jiān)督管理局認可的、具有相應承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行注冊檢測。由于 C 反應蛋白目前尚無國家標準品，申請人應建立自己的參考品體系并提供相應的內(nèi)部參考品。 （五）主要原 材料研究資料 1．試劑盒所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細試驗資料。如抗體為申請人自制，則應詳述抗體的名稱及生物學來源，申請人對該抗體技術(shù)指標的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)； 如抗體為申請人外購，則應詳述抗體的名稱及生物學來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標及檢驗證書，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。 2．其他主要原輔料的選擇及驗證資料，如包被板、反應緩沖液等，申請人應詳述每一原輔料技術(shù)指標的 要求以及確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。若為外購，應詳述每一原輔料的外購方名稱并提交外購方出具的每一原輔料性能指標及檢驗證書。 3．企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料。 （六）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料 ，可以流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 。 /致敏工藝研究：申請人應考慮如包被液量、濃度、時間、溫度等指標對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標的最佳組合。 ：申請人因考慮反應時間、反應溫度、pH 值等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。 ：申請人應考慮樣品加樣方式、加樣量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應對可用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法進行研究，通過試驗確定最終選擇的用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法。確定反應所需其他物質(zhì)用量（標準品、酶標物、底物等）的研究資料。固相載體、顯色 (發(fā)光 )系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹。 。 （七）分析性能評估資料企業(yè)應提交原廠在產(chǎn)品研制階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、實驗數(shù)據(jù)、質(zhì)控標準、統(tǒng)計分析等詳細資料。對于 C 反應蛋白定量檢測試劑盒建議至少選擇 3 批產(chǎn)品對以下分析性能進行研究：分析靈敏度、準確度、特異性、線性范圍、精密度（批間、批內(nèi)）等指標，具體研究方法建議參考相關(guān)指導原則。 對于適用多個機型的產(chǎn)品，應提供如產(chǎn)品說明書【適用機型】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料 。 （ 1）與企業(yè)內(nèi)部參考品的比對研究使用已溯源的企業(yè)內(nèi)部定值參考品進行驗證，重點觀察檢測結(jié)果的偏差情況。 （ 2）回收試驗用于評估定量檢測方法準確測定加入純分析物的能力，結(jié)果用回收率表示。通常對樣本進行 2～ 3次回收試驗，取平均值即平均回收率。 回收試驗注意事項： ①加入的標準液體積一般應小于樣本體積的 10%； ②盡量使加入標準液后樣本中的被測物濃度接近醫(yī)學決定水平； ③標準物濃度應該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本； ④注意基質(zhì)效應，盡量采用與 臨床待測樣本接近的基質(zhì)。 （ 3）方法學比對采用參考方法或國內(nèi) /國際普遍認為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。 在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質(zhì)量控制、 樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學分析。 注： C 反應蛋白目前尚無國家參考品，以后國家參考品若建立，優(yōu)先采用（ 1）方法； 本產(chǎn)品不建議采用方法 (2)衡量準確度。 品（或樣品稀釋液）進行至少 20 次重復檢測，以空白均值加兩倍標準差報告方法的檢測限（ +2SD）。 際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清，且應充分考慮多倍稀釋對樣本 基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預期測定范圍內(nèi)選擇 7～ 11 個濃度水平。例如，將預期測定范圍加寬至 130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。 ，兩個濃度包括醫(yī)學決策點附近的數(shù)據(jù)、報告范圍上下限附近的濃度值，通常選用該檢測指標的正常參考值（范圍）附近和異常高值樣本。兩個濃度都選用高值樣品，可能致 CV 偏小，也不能選用接近最低檢出限的樣品，可能致 CV 偏大。對 hsCRP，其中一個水平應處于美國心臟協(xié)會 /美國疾病預防控制中心（ AHA/CDC）給出的低風險類的臨床節(jié)值（ ），其 CV應≤ 10%； 中間水平應處于檢測范圍的中點； 第三個水平應處于檢測上限的附近。 (1)交叉反應：易產(chǎn)生交叉反應的其他抗原、抗體等的驗證情況； (2)干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如高脂、黃疸、類風濕因子等干擾因子的研究（結(jié)果應量化表示，禁用輕度、嚴重的模糊表述）； (3)藥物影響：常見相關(guān)治療藥物對檢測結(jié)果的影響 。 （ Hook）效應（如有）：說明不會產(chǎn)生 Hook 效應的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。 （八）參考值（參考范圍）確定資料參考值（范圍）確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細的試驗資料。建議參考 CLSI/NCCLSC28A2。 （九）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、運輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究 方案。穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。 試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。 （十）臨床試驗資料 、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類試劑作為參比試劑。 （ 1）第二類產(chǎn)品申請人應當選定不少于 2家（含 2 家）省級衛(wèi)生醫(yī)療機構(gòu)開展臨床試驗。 （ 2）臨床研究單位應有能力提供臨床評價所需的各類樣本，實驗操作人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、 質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和參比試劑都應處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進行校準，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。 （ 3）不同的臨床單位應使用同一批考核試劑進行臨床試驗，以便對數(shù)據(jù)進行科學客觀的統(tǒng)計分析。 ，研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構(gòu)的方案設置應基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床研究機構(gòu)的實驗 室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。 試驗方案中應確定嚴格的病例納入 /排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應采用盲法及樣本隨機分配以保證試驗結(jié)果的客觀性。對于新試劑的動態(tài)監(jiān)測研究，應在方案中明確前后兩次濃度變化有臨床意義的標準。臨床試驗中所涉及的樣本類型應與產(chǎn)品說明書一致，且每種樣本類型例數(shù)的選擇應符合基本的統(tǒng)計學要求。各研究單位選用的參比試劑及所 用機型應一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。 (1)臨床試驗樣本量的確定：申請人或臨床研究者應根據(jù)產(chǎn)品臨床使用目的，與該改產(chǎn)品相關(guān)疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。在符合指導原則有關(guān)最低樣本要求的前提下，還應符合統(tǒng)計學要求。 ①臨床研究的總樣本數(shù)至少為 200 例。 ②應考慮樣本量的分布。樣本量的選擇應符合統(tǒng)計學及相關(guān)指導原則的要求。 ③樣本濃度應覆蓋考核試劑檢測范圍，盡可能均勻分布。盡可能使 30%樣本的測定值處于參考區(qū)間以外，但在測量范圍內(nèi)。 另外，建議 在臨床試驗中選擇部分含干擾物質(zhì)的標本進行對比研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風濕因子陽性樣本，易共存的其他急性炎癥時相因子同時升高的患者標本，以從臨床角度驗證試劑的特異性。 ，如相關(guān)分析、線性回歸、受試者工作特征（ ROC）曲線分析等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對考核試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應重點觀察相關(guān)系數(shù)（ r值）或判定系數(shù)（ R2）、回歸擬合方程（斜率和 y軸截距）等指標。結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正 /偏態(tài)分布情況，建議 統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設，即評價考核試劑與參比試劑是否等效的標準。 ，對于兩種試劑的檢測結(jié)果有明顯差異的樣本，應采用臨床上普遍認為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進行驗證試驗，同時結(jié)合患者的臨床病情對差異原因及可能結(jié)果進行分析。 《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。 （ 1）臨床試驗總體設計及方案描述①臨床試驗的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹； ②病例納入 /排除標準、不同年齡段人群的預期選擇例數(shù)及標準； ③樣本類型，樣本的收集、 處理及保存等； ④統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。 （ 2）具體的臨床試驗情況①考核試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息； ②對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比； ③質(zhì)量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估； ④具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗等。 （ 3）統(tǒng)計學分析①數(shù)據(jù)預處理、差 異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。 ②定量值相關(guān)性和一致性分析用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以 y=a+bx 和 R2 的形式給出回歸分析的擬合方程，其中： y是考核試劑結(jié)果， x是參比試劑結(jié)果， b是方程斜率， a 是 y軸截距， R2 是判定系數(shù)，同時應給出 b的 95%（或 99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應無明顯統(tǒng)計學差異。 （ 4）討論和結(jié)論對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。 三、名詞解釋 （ AnalyticalSpecificity）：測量程序只測量被測量物的能力。分析特異性用于描述檢測程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時只測量被測量物的能力。通常以一個被評估的潛在干擾物清單來描述，并給出在特定醫(yī)學相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。 注：潛在干擾物包括干擾物和交叉反應物。 （ Precision）：在規(guī)定條件下，相互獨立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計學方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標準差（ SD）和變異系數(shù)（ CV）。 四、參考文獻 1.《體外診斷試劑注冊管理辦法（試行）》，（國食藥監(jiān)械〔 2021〕 229 號）。 2.《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導原則》，（國食藥監(jiān)械〔 2021〕240 號）。 3.《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》，（國食藥監(jiān)械〔 2021〕240 號）。 ，《臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)》，第二版，上?？茖W技術(shù)文獻出版社， 2021年 4月。 (CRP),HighSensitivityCReactivePr